囊絲黃精polygonatumcyrtonemahua.凝集素ⅱ基因在大腸桿菌中克隆表達(dá)、重組蛋白純化及性質(zhì)研究

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文囊絲黃精（Polygonatum cyrtonema Hua.）凝集素Ⅱ基因在大腸桿菌中克隆表達(dá)、重組蛋白純化及性質(zhì)研究姓名：安潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)及分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：鮑錦庫(kù);吳洽慶20060501四川大學(xué)碩士論文腸桿菌；基因表達(dá)；蛋白質(zhì)純化；重組蛋白；兔紅細(xì)胞凝集活性；促T 淋巴細(xì)胞有絲分裂活性；抗病毒活性；細(xì)胞毒性；人類(lèi)I I 型單純皰疹病毒E x p r e s s i o n 。 P u r

2、i f i c a t i o na n dC h a r a c t e r i z a t i o no fP o l y g o n a t u r n C y r t o n e m aH u aL e c t i n I I i nE s c h e r i c h i ac o l iM a j o r , ． B i o c h e m i s t r y a n dM o l e c u l a r B i o l o

3、g yA u t h o r ：A N J i e S u p e r v i s o r ：B a oJi n - k u a n dW uQ i a q i n gA b s t r a c t ：T oe x p r e s st h eg e n ec o d i n gm a t u r ep e p t i d eo fP o l y g o n a t u mc y r t o n e m aH u n l e c t i

4、 nI I ，p E T - Pe x p r e s s i o np l a s m i d sw e r ec o n s t r u c t e db yi n s e r t i n gt h ec D N Af r a g m e n to ft h em a t u r ep e p t i d ei n t ov e c t o rp E T 3 2 a( + ) ．T h e nt h ev e c t o r sw

5、i t hp E Te x p r e s s i o n p l a s m i d s w e r et r a n s f o r m e dt oE c o ] i B L 2 1 ( D E 3 ) ．T h ep o s i t i v ec l o n e s w e r ei d e n t i f i e db yC o l o n yW e s t e r nB l o t ．A f t e rEc o l i W

6、f l Si n d u c e db yI P T G ，S D S —P A G Ea n a l y s i ss h o w e dt h a t2 9 k Df u s i o np r o t e i n sw e r ee x p r e s s e d ．T h e nt h ee x p r e s s i o n c o n d i t i o n sw e r eo p t i m i z e dt o p r e

7、 v e n tt h ef o r m a t i o no fi n c l u s i o nb o d i e s ．I nt h eu p p e r l y s e d c e l l s ，r e c o m b i n a n t p r o t e i n s w i t h H i s 6 - t a g i n t h e i rN —t e r m i n a l s w e r e p u r i f i e

8、d b y m e t a l a f f i n i t y c h r o m a t o 鯽h y f i r s t ．A f t e r t h a t ，t h e t a g s c a n b e c l e a v e d f r o m t h e f u s i o n p r o t e i n s b ye n t e r o k i n a s e ．F i n a l l y ，t h ep u r i f

9、 i e dr e c o m b i n a n t P C L l lw e r eo b 姐i n e d( a b b r e v ．r P C L I I ) b y m e t a l a f f i n i t yc h r o I n a t o g r a p h ya g a i na n df o l l o w e db yi o n e x c h a n g ec h r o m a t o g r a p

10、h y ．W e s t e r nB l o ts h o w e dt h a tt h ep u r i f i e dr P C L I Ic a n r e a c tw i t hR G S - H i sa n dr a b b i t a n t i s e r u mo fp u r i f i e dn a t u r a lP C L I I ( a b b r e v ．n P C L I I ) ．I ts u