IFN-γ誘導鸚鵡熱嗜衣原體持續(xù)性感染及相關基因的表達.pdf

1、目的：建立IFN-γ誘導的鸚鵡熱嗜衣原體（Chlamydophila psittaci，Cps）持續(xù)性感染的細胞模型，檢測與Cps6BC持續(xù)性感染相關基因的表達變化。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)HeLa單層細胞感染Cps6BC標準菌株，分別用5、15、25、35、45、55ng/mL的人重組干擾素-γ（recombinant hunan IFN-γ，rhIFN-γ）誘導Cps6BC持續(xù)性感染30h和用35ng/mL rhIFN

2、-γ誘導12、24、36、48、60h，利用間接免疫熒光染色法（indirect immunofluorescence assay，IFA）檢測Cps6BC感染能力的變化。用IFA和透射電鏡檢測rhIFN-γ誘導Cps6BC持續(xù)性感染后包涵體形態(tài)的變化。rhIFN-γ誘導Cps6BC持續(xù)性感染后，去除誘導劑，補充足量的L-色氨酸，利用IFA和透射電鏡檢測Cps6BC感染能力和包涵體形態(tài)的恢復情況。用Realtime-PCR檢測Cps6B

3、C持續(xù)性感染狀態(tài)下目的基因的mRNA表達水平的變化以及Western blot檢測CPSIT_0844、CPSIT_0594蛋白表達水平的變化。
　　結果：
　　用不同濃度的rhIFN-γ誘導Cps6BC標準株持續(xù)性感染30h后，Cps6BC的感染能力均降低，且呈明顯的劑量依賴關系。35ng/mL rhIFN-γ誘導不同時間后， Cps6BC的感染能力也出現(xiàn)不同程度的下降，尤其是36、48、60h后感染能力顯著降低。IFA和

4、透射電鏡觀察顯示，rhIFN-γ誘導后，Cps6BC包涵體體積變小，結構疏松，并可見異形網(wǎng)狀體，成熟子代原體數(shù)目減少，呈現(xiàn)典型的持續(xù)性感染特征。去除誘導劑，補充足量的L-色氨酸后，Cps6BC的感染能力及包涵體形態(tài)均可恢復到急性感染狀態(tài)。
　　rhIFN-γ誘導Cps6BC持續(xù)性感染后，CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0959、CPSIT_0594、CPSIT_0310、CPSIT_0870、CPSIT_0

5、057、CPSIT_0208在mRNA水平的表達均發(fā)生了一定的改變。核糖體蛋白CPSIT_0870在2～36h顯著上調(diào)，而半胱氨酸脫硫酶CPSIT_0959在36h、48h顯著下調(diào)。Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應蛋白CPSIT_0594、CPSIT_0844均在2～48h上調(diào)，且分別在36h和48h顯著上調(diào)，而CPSIT_0846在2～24h顯著上調(diào)，36h后顯著下調(diào)。膜蛋白CPSIT_0057、CPSIT_0310在2～48h上調(diào)，而CPSIT_0

6、208在48h后下調(diào)。Western blot結果顯示，rhIFN-γ誘導Cps6BC持續(xù)性感染后，CPSIT_0844、CPSIT_0594蛋白表達的改變與其mRNA水平的表達變化一致。
　　結論：
　　1.建立了rhIFN-γ誘導的Cps6BC持續(xù)性感染細胞模型；
　　2. CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0959、CPSIT_0594、CPSIT_0310、CPSIT_0870、CPSIT