鸚鵡熱衣原體檢測(cè)技術(shù)研究及重慶鸚鵡熱衣原體流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、鸚鵡熱衣原體（Chlamyida psittaci）引起的人畜共患病日趨嚴(yán)重，但其診斷尚缺乏準(zhǔn)確快速的檢測(cè)手段。因此迫切需要建立準(zhǔn)確、快速的鸚鵡熱衣原體PCR和RT-QPCR檢測(cè)方法。為此，我們利用PCR和RT-QPCR建立了準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)方法，研制出鸚鵡熱衣原體PCR檢測(cè)試劑盒；利用建立的定量PCR檢測(cè)初步探索了鸚鵡熱衣原體感染同檢測(cè)間的量化關(guān)系；并利用建立的PCR方法同IHA方法對(duì)比進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。本研究主要獲得以下研究結(jié)果：<

2、br>　?、冫W鵡熱衣原體PCR檢測(cè)方法的建立。利用NCBI上公布的鳥源主要外膜蛋白MOMP基因序列（PSITTACI457203）設(shè)計(jì)引物，利用鴨源 CS1 DNA為模板，通過優(yōu)化反應(yīng)體系，得到100 bp的目標(biāo)檢測(cè)片段，建立了鸚鵡熱衣原體的PCR檢測(cè)方法，靈敏度可以達(dá)到2.5×10-5 ng/μl模板量，構(gòu)建了鸚鵡熱衣原體PCR檢測(cè)試劑盒。
　?、邴W鵡熱衣原體Real-time quantitative PCR檢測(cè)方法的建立。將

3、PCR擴(kuò)增得到的目標(biāo)片段作為Real-time quantitative PCR的模板和陽性對(duì)照，利用兩種定量PCR儀分別建立了鸚鵡熱衣原體定量 PCR反應(yīng)體系。所建立的Real-time quantitative PCR檢測(cè)方法，在模板濃度范圍1.78×102-1.78×108拷貝/μl時(shí)，其線性相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.998；融解曲線只有唯一的峰值，Tm值為79.1℃；批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV％)分別為1.30-4.59%和5.72-9.8

4、7%。
　?、劾媒⒌柠W鵡熱衣原體Real-time quantitative PCR檢測(cè)方法進(jìn)行小白鼠感染的量化分析試驗(yàn)。通過對(duì)隨機(jī)分成的7組，每組12只的小白鼠，一組為對(duì)照組，其他各組同時(shí)腹腔注射Cps菌液，每天進(jìn)行1次抽樣檢測(cè)，監(jiān)控小白鼠感染后的體內(nèi) Cps量的變化關(guān)系，初步探索了動(dòng)物 CPS感染和Real-time quantitative PCR檢測(cè)的量化關(guān)系。
　?、軐?duì)重慶市6個(gè)區(qū)縣不同養(yǎng)殖環(huán)境下的禽類隨機(jī)采集