用基因工程技術(shù)創(chuàng)造低酚棉材料.pdf

1、棉酚與其它保護(hù)萜類都是次生代謝物，在植物對害蟲的自我保護(hù)系統(tǒng)中增加植物抵抗能力。(+)-δ-杜松烯合酶基因與棉酚合成過程有密切的關(guān)系。本課題分別構(gòu)建(+)-δ-杜松烯合酶基因的兩個(gè)亞組CAD1-c、CAD1-a目標(biāo)序列的干涉載體并進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化。其中，CAD1-a也構(gòu)建了含有種子特異啟動(dòng)子的干涉載體，以期望得到種子中沒有棉酚，而植株中含有棉酚的棉花材料。隨后，用qRT-PCR技術(shù)驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因材料中目標(biāo)基因和棉酚合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平。獲得

2、以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　(1)通過RT-PCR分析杜松烯合酶基因與棉酚合成相關(guān)基因的表達(dá)模式得出，F(xiàn)PS、P450、dHG-6-OMT在根和子葉中高度表達(dá);CAD1-c在棉花莖、葉、萼片和果皮中有所表達(dá)，但在開花期沒有表達(dá);CAD-a在這些組織中均未表達(dá)。
　　(2)分別構(gòu)建了CAD-a和CAD-c基因的以35S驅(qū)動(dòng)的干涉載體，同時(shí)構(gòu)建了CAD-a基因的種子特異啟動(dòng)子干涉載體。通過遺傳轉(zhuǎn)化獲得相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因棉花。
　　(3)

3、分析轉(zhuǎn)基因棉花材料CAD基因表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，當(dāng)干涉掉CAD1-c基因后，CAD1-a基因上調(diào)表達(dá);干涉掉CAD1-a基因，CAD1-c基因上調(diào)表達(dá)，說明基因CAD1-a和基因CAD1-c在功能上可能有一定的互補(bǔ)作用。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)把CAD1-a基因干涉很徹底時(shí)，CAD1-c基因的表達(dá)量也會(huì)很低，dHG-6-OMT表達(dá)水平明顯上升，說明CAD1-口基因在一定程度上可以調(diào)控CAD1-c基因的表達(dá)。
　　(4)分析轉(zhuǎn)基因材料的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，