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文檔簡介
1、揚州大學博士學位論文基因工程技術提高稻米賴氨酸含量姓名:劉巧泉申請學位級別:博士專業(yè):作物栽培與耕作指導教師:顧銘洪;辛世文20020501揚州大學博士學位論文建成嵌合基因,并導入同一個水稻品種中。對轉基因水稻中的G U S 活性分析表明: ( 1 ) 所有啟動子都能指導G U S 基因在轉基因水稻種子的胚乳中表達,但不同啟動子的表達強弱有差別,其中醇溶蛋白和谷蛋自基因啟動子明顯伐于R A G t和C a M V 3 5 S 啟動子,玉
2、米U b i 啟動子也可高水平地指導G U S 基因在轉基因水稻胚乳中表達; ( 2 ) 谷蛋白啟動子的胚乳特異性表達特征最明顯,其次為醇溶蛋白劇巧,R A G l 幾乎沒有種子特異性表達特征: ( 3 ) 在G U S 編碼區(qū)起始密碼子A T G 前融合上酵溶蛋自N 一端信號肽編碼序列后,由R 硝啟動予引導的G U S 融合基因的轉錄活性明顯增強,但卻不能檢測或只檢測到極微量的G U S 活性,其機理尚不清楚。其次,根據(jù)上述對不同啟動
3、子表達的比較,選用了谷蛋白和醇溶蛋白基因的啟動f 及其5 ’調(diào)控序列與L R Pc D N A 構建了多個嵌合基因,并都導入了同一個水稻品種中,獲得了大量轉基因水稻植株。對轉基因水稻植株種子中L R P 嵌合基因的表達進行了詳細的分析,主要結論如下: ( 1 ) 在水稻種子貯藏蛋白基因啟動子的指導下,L R P 能在轉基因水稻種子中高效表達并穩(wěn)定積累,最高表達量可占水稻鹽溶性種子總蛋白的1 2 %,不同轉基因水稻植株種子中的表達量差別較
4、大;( 2 ) 谷蛋白G t l 啟動子與醇溶蛋白R P 5 啟動子都可指導L R P 在轉基因水稻種子中高效表達,兩者之間并沒有明顯的差別; ( 3 ) 谷蛋白G t l 的信號肽編碼序列融合在L R Pc D N A 的5 ’端后,可促進L R P 的轉錄,在翻譯后能正確地加工去除該信號肽序列,但最后的L R P 表達量并沒有增多。( 4 ) 在轉基因水稻種子中高表達L R P 后,對提高種子中的賴氨酸含量確有一定的作用,尤其是在提
5、高蛋白質結合總氨基酸中的賴氨酸含量有顯著的效果; ( 5 ) L R P 嵌合基因能在轉基因水稻中穩(wěn)定遺傳,T 1 代轉基因水稻植株間L R P 嵌合基因的遺傳分離大多符合3 :1 的簡單遺傳模型; ( 6 ) 為借助于農(nóng)桿菌介導的共轉化法培育可剔除抗性選擇標記轉基因水稻,構建了含雙T .D N A 區(qū)的超雙元載體,證明用超雙元載體法或雙載體法都可將外源基因‘吾抗性選擇標記基因同時導入并整合到同一個水稻細胞的基因組中,但雙載體法中的共整
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