黃芩苷的抗結(jié)核分枝桿菌作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　自20世紀(jì)80年代結(jié)核病疫情重新上升，成為近年來(lái)最為重要的傳染病，耐藥菌株流行是結(jié)核疫情日趨嚴(yán)重的主要原因，與HIV感染及抗結(jié)核藥物使用不當(dāng)、治療不合理、患者依從性差等有關(guān)，使抗結(jié)核化療藥物面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。近年來(lái)抗結(jié)核中藥領(lǐng)域研究較多，已開(kāi)發(fā)出多種抗結(jié)核中藥，不易產(chǎn)生耐藥且毒副作用小。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)黃芩苷有廣泛的抗菌譜，但尚未有報(bào)道其對(duì)結(jié)核分枝桿菌是否有抑菌作用，故本實(shí)驗(yàn)針對(duì)結(jié)核化療藥物毒副作用大且耐藥嚴(yán)重等問(wèn)題，通過(guò)對(duì)黃芩

2、苷體外抑菌試驗(yàn)及電子顯微鏡觀察黃芩苷作用前后結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，探討黃芩苷的抗結(jié)核分枝桿菌的作用及作用機(jī)制，為臨床開(kāi)發(fā)新的抗結(jié)核藥提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　試驗(yàn)通過(guò)制備改良羅氏培養(yǎng)基，配制濃度梯度為48mg/ml、12mg/ml、6mg/ml、3mg/ml、1.5mg/ml、0.75mg/ml、0.375mg/ml的含黃芩苷的培養(yǎng)基，并將臨床結(jié)核菌株接種于不同濃度的含藥培養(yǎng)基中，通過(guò)體外37℃溫箱孵育4周后，

3、觀察中藥黃芩苷在不同濃度梯度下對(duì)結(jié)核分枝桿菌的抑菌作用，利用絕對(duì)濃度梯度法判斷結(jié)果，以培養(yǎng)皿無(wú)菌落生長(zhǎng)的最低藥物濃度為黃芩苷對(duì)該菌株的最低抑菌濃度(MIC)，并計(jì)算藥物對(duì)50％菌株的MIC(MIC50)及90％菌株的MIC(MIC90)。制備不含藥的空白培養(yǎng)基和含有不同MIC濃度黃芩苷的改良羅氏培養(yǎng)基，接種臨床菌株后，通過(guò)體外37℃溫箱孵育4周后，取正常結(jié)核分枝桿菌及不同抑菌濃度的黃芩苷作用后的結(jié)核分枝桿菌，經(jīng)離心漂洗、固定、包埋、切片

4、、雙染色后通過(guò)投射電子顯微鏡觀察黃芩苷作用前后結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　中藥黃芩苷體外抑菌試驗(yàn)顯示：60株臨床結(jié)核菌株中，1株菌的MIC大于48mg/ml，故MIC為48mg/ml按0％計(jì)數(shù)；7株菌的MIC為12mg/ml，占11.67％；25株菌的MIC為6mg/ml，占41.67％；22株菌的MIC為3mg/ml，占36.67％；5株菌的MIC為1.5mg/ml，占8.33％。MIC在3-6mg/m

5、l范圍內(nèi)的菌株數(shù)占78.34％，MIC在3-12mg/ml范圍內(nèi)的菌株數(shù)占90.01％，其中3mg/ml的黃芩苷所占比例很接近6mg/ml的黃芩苷濃度所占比例，以6mg/ml的黃芩苷濃度所占比例最大。說(shuō)明在體外抑菌試驗(yàn)中，6mg/ml的黃芩苷濃度條件下絕大多數(shù)臨床結(jié)核分枝桿菌可被抑制。取不同抑菌濃度的黃芩苷作用后的結(jié)核分枝桿菌及空白培養(yǎng)基生長(zhǎng)的正常結(jié)核分枝桿菌，經(jīng)處理后通過(guò)電子顯微鏡觀察黃芩苷作用前后結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)：

6、通過(guò)投射電子顯微鏡可以清楚地觀察到結(jié)核分枝桿菌的正常形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。隨著黃芩苷濃度的增加結(jié)核菌逐漸皺縮變形直至降解，菌壁及胞膜逐步部分或全部降解，部分胞質(zhì)濃縮或疏散，電子密度降低，絲狀DNA消失。至3/4MIC時(shí)所有結(jié)核桿菌形態(tài)均不正常，整個(gè)桿菌結(jié)構(gòu)模糊不清，菌壁消失，胞膜部分或全部降解，核糖體顆粒很少見(jiàn)，見(jiàn)不到絲狀DNA，部分核質(zhì)濃聚，電子密度變低。
　　結(jié)論：
　　通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃芩苷對(duì)臨床60株結(jié)核分枝桿菌均有抑