TBLR1-RARα融合基因?qū)562向紅系分化的影響.pdf

1、中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院(清華大學醫(yī)學部)碩士學位論文碩士學位論文學校代碼：10023學號：$2012014017TBLRlRARcx融合基因?qū)562向紅系分化的影響所院：姓名：指導教師：導師小組：學科專業(yè)：研究方向：完成時間：血液學研究所陳晶王建祥教授王敏教授、饒青教授內(nèi)科學白血病發(fā)病機制2015年5月中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院(清華大學醫(yī)學部)碩士學位論文TBLRlRARo【融合基因?qū)562向紅系分化的影響中文摘要研究目的

2、：實驗室前期研究工作，在一例疑難早幼粒細胞白血病(acutepromyelocyticleukemiaAPL)病例中發(fā)現(xiàn)了一個新的t(3；17)(q26；q21)突變異位，并且通過5’RACE(5’rapid—amplificationofcDNAends)方法鑒定發(fā)現(xiàn)APL新的融合基因TBLRl一RARo【。本研究旨在探討融合基因TBLRl№的表達對于白血病細胞系K562細胞向紅系分化的作用，并探討其可能的機制。研究方法：利用四環(huán)素可

3、誘導表達體系Tet—Off系統(tǒng)，構(gòu)建TBLRl一RARoc表達載體pLVX—Tight—Puro—TBLRl一RAR(x—flag，通過PEI轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，收獲病毒，對K562細胞進行感染，以G418及嘌呤霉素篩選穩(wěn)定克隆。實驗所用的為Tet—Off系統(tǒng)，在不加強力霉素(doxycyclin，Dox)誘導時，TBLRl一RARo【融合基因可以表達。而加入Dox誘導后，TBLRl。RAR0‘不再表達，即可以通過Dox來控

4、制該融合基因的表達與否。應用實時定量熒光PCR，檢測全反式維甲酸(All—transretinoidacid，ATRA)處理可誘導表達TBLRlRARe的K562細胞(K562TR)后，K562TR細胞紅系分化的表面抗原CD71及儀，￡，Y珠蛋白的基因表達水平，流式細胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)ACS)分析細胞表面CD71和CD235a的表達情況，聯(lián)苯胺染色觀察血紅蛋白的生成情況。研究結(jié)果：當TBLRl一RARⅨ融合基因表達時，

5、與K562TR紅系分化相關(guān)的CD71以及儀，￡，Y一珠蛋白的基因表達增DII；流式分析結(jié)果同樣表明紅系分化早期標志CD71細胞所占比例增加。聯(lián)苯胺染色證實當以ATRA處理后，胞漿出現(xiàn)藍染，表明TBLRlRARer可以誘導K562一TR細胞產(chǎn)生血紅蛋白。結(jié)論：TBLRlRARt]【融合基因的表達一定程度上可促使K562細胞向紅系分化。研究結(jié)論：TBLRIRA№融合基因的表達一定程度上可促使K562細胞向紅系分化。關(guān)鍵詞：TBLRlRARc