siRNA沉默NR-f2基因?qū)562-G01細(xì)胞株伊馬替尼耐藥性的影響.pdf

1、目的：
　　 研究核因子NF-E2相關(guān)因子-2(Nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2)在慢性粒細(xì)胞白血病伊馬替尼耐藥細(xì)胞株(K562/G01)及敏感細(xì)胞株(K562)中的表達(dá)情況;觀察Nrf2-siRNA干擾K562/G01細(xì)胞株后Nrf2的表達(dá)及其對(duì)伊馬替尼耐藥情況的變化，以期為慢性粒細(xì)胞白血病(Chronic myelocyticleukemia，CML)的進(jìn)一步治療提

2、供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)及Western bolt比較Nrf2在敏感細(xì)胞株K562和伊馬替尼耐藥細(xì)胞株K562/G01中mRNA及蛋白的表達(dá)水平;
　　 2)以慢病毒為載體，將Nrf2-siRNA目的基因轉(zhuǎn)染K562/G01細(xì)胞，利用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)及流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測轉(zhuǎn)染后的效率，用RT-qPCR及Western bolt檢測siRN

3、A對(duì)Nrf2表達(dá)量的抑制效率;
　　 3)采用CCK-8比色法測定Nrf2-siRNA干擾前后細(xì)胞的耐藥指數(shù);FCM測定干擾前后伊馬替尼對(duì)細(xì)胞凋亡率的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1) Nrf2在K562/G01細(xì)胞株中的表達(dá)水平顯著高于K562細(xì)胞株，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　 2)轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后，K562/G01細(xì)胞中Nrf2 mRNA和蛋白的表達(dá)明顯受抑，(P＜0.05);

4、Nrf2 mRNA表達(dá)水平下調(diào)（66.3±0.42）％，Nrf2蛋白表達(dá)水平下調(diào)(65.82±2.36)％;
　　 3)成功建立了穩(wěn)定低表達(dá)Nrf2的K562/G01細(xì)胞模型;
　　 4)轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后，K562/G01細(xì)胞對(duì)伊馬替尼的耐藥指數(shù)明顯減小，K562/G01空白組、NC-GFP-LV對(duì)照組及Nrf2-RNAi-LV轉(zhuǎn)染組的IC50分別為22.64μmol/L、21.37μmol/L、14.64-μ