扶正祛邪復(fù)方對(duì)K562-AO2細(xì)胞耐藥性及Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本課題以扶正祛邪中藥復(fù)方制成的含藥血清，對(duì)人慢粒急變耐藥細(xì)胞株K562/A02進(jìn)行處理。通過(guò)檢測(cè)不同劑量扶正祛邪中藥復(fù)方含藥血清（以下均簡(jiǎn)稱(chēng)為含藥血清）對(duì)耐藥細(xì)胞株K562/A02耐藥性的逆轉(zhuǎn)，以及K562/A02中Bcl-2蛋白的表達(dá)情況，觀察經(jīng)含藥血清處理后的K562/A02對(duì)阿霉素(ADM)耐藥性的逆轉(zhuǎn)效果，并探討含藥血清逆轉(zhuǎn)K562/A02對(duì)ADM耐藥性的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.中藥復(fù)方的制備:扶正祛邪

2、中藥復(fù)方由人參、黃芪、麥冬、五味子、青黛（包煎）、白花蛇舌草等純中藥材組成，按照常規(guī)方法水煎兩次，合并水煎液，濃縮為1g/ml的濃縮藥液，4℃保存?zhèn)溆谩?br>　　2.含藥兔血清的制備:將28只新西蘭大白兔隨機(jī)分為空白對(duì)照組和高、中、低劑量實(shí)驗(yàn)組共4組，對(duì)低劑量組灌服3g（生藥）/kg（體重）中藥液、中劑量組灌服6g（生藥）/kg（體重）中藥液、高劑量組灌服12g（生藥）/kg（體重）中藥液，每日2次，連續(xù)灌胃3天，空白對(duì)照組正常喂養(yǎng)，

3、于末次給藥后2小時(shí)無(wú)菌條件下股動(dòng)脈取血，分離血清，組內(nèi)血清混合，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，置-20℃保存?zhèn)溆谩?br>　　3.細(xì)胞培養(yǎng):分別將細(xì)胞株K562和K562/A02置于37℃、5％CO2條件下，接種于含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在K562/A02培養(yǎng)體系中加入濃度為1μg/ml的ADM維持其耐藥性，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，2～3天傳代一次，并更換細(xì)胞液。
　　4.MTT法分別檢測(cè)ADM對(duì)細(xì)胞株K562

4、、K562/A02的細(xì)胞毒性，計(jì)算細(xì)胞K562/A02的耐藥倍數(shù);MTT法檢測(cè)經(jīng)不同劑量含藥血清聯(lián)合ADM處理后的細(xì)胞K562/A02對(duì)ADM耐藥性的逆轉(zhuǎn)倍數(shù);流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)不同劑量含藥血清處理后的耐藥細(xì)胞K552/A02內(nèi)Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)均使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，檢測(cè)結(jié)果均以X±s表示，IC50應(yīng)用線(xiàn)性回歸方法計(jì)算，不同組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。P＜0.05為結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

5、。
　　結(jié)果:
　　1.耐藥細(xì)胞株K562/A02的耐藥倍數(shù)檢測(cè)結(jié)果:在細(xì)胞株K562、K562/A02的培養(yǎng)液中分別加入不同濃度ADM配制液，培養(yǎng)72小時(shí)后，ADM分別對(duì)這兩種細(xì)胞產(chǎn)生了不同的細(xì)胞毒性作用，自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞株K562的IC50值為0.62±0.16μg/ml，K562/A02的IC50值為25.29±1.05μg/ml，耐藥倍數(shù)RF=40.59。
　　2.高、中、低劑量含藥血清對(duì)耐藥細(xì)胞K562/A

6、02耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用:高劑量含藥血清+ADM組逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為29.27倍;中劑量含藥血清+ADM組逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為9.96倍;低劑量含藥血清+ADM組逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為5.65倍。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同劑量含藥血清組對(duì)細(xì)胞株K562/A02中Bcl-2蛋白表達(dá)水平的影響:高劑量含藥血清+ADM組中Bcl-2的表達(dá)最低;空白對(duì)照組中Bcl-2的表達(dá)最高;各組Bcl-2表達(dá):（高劑量含藥血清+ADM組）＜（中劑量含藥血清+ADM組）＜（干擾素+A

7、DM組）＜（低劑量含藥血清+ADM組）＜（正常兔血清+ADM組）。低劑量含藥血清+ADM組、中劑量含藥血清+ADM組、高劑量含藥血清+ADM組、陽(yáng)性對(duì)照組分別與空白對(duì)照組比較，均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);除高劑量含藥血清+ADM組與陽(yáng)性對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外(P＜0.01)，中劑量含藥血清+ADM組及低劑量含藥血清+ADM組與陽(yáng)性對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.含藥血清可一定程度上增