siRNA干擾Nrf2逆轉(zhuǎn)伊成替尼耐藥細(xì)胞株K562-G01耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 研究siRNA干擾核因子NF-E2相關(guān)因子-2(Nuclear factor erythroid2-relatedfactor2，Nrf2)對(duì)伊馬替尼耐藥細(xì)胞株K562/G01耐藥性的影響及其機(jī)制。
　　 方法：
　　 (1)以慢病毒為載體，將Nrf2-siRNA轉(zhuǎn)染至K562/G01細(xì)胞，利用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)及流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)

2、及Western bolt檢測(cè)Nrf2-siRNA干擾前后K562/G01細(xì)胞中Nrf2及其下游基因TrxR mRNA和蛋白的表達(dá)水平;
　　 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Nrf2-siRNA干擾前后K562/G01細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的水平;
　　 (3)分別用CCK-8比色法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Nrf2-siRNA干擾前后K562/G01細(xì)胞的耐藥指數(shù)、凋亡率。
　　 結(jié)果：
　　 (1) Nrf2-siRNA

3、可抑制K562/G01細(xì)胞Nrf2及其下游基因TrxR mRNA和蛋白的表達(dá)(P＜0.05);
　　 (2)轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后，K562/G01細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　 (3)轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后，K562/G01細(xì)胞的耐藥指數(shù)降低、凋亡率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 Nrf2通過發(fā)揮其保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷和抗凋亡的作