阿苯達(dá)唑納米微粉體外HL-7702肝細(xì)胞毒性的初步研究.pdf

1、目的：納米級藥物可能產(chǎn)生特殊的惡性生物學(xué)效應(yīng)，本試驗通過與ABZ原料做對比，對采用優(yōu)化工藝制備的納米級 ABZ微粉進(jìn)行表征，并初步分析納米級 ABZ微粉體外對HL-7702細(xì)胞的生物毒性及氧化損傷作用，以初步評價ABZ納米微粉的安全性。
　　方法：1、與原料做對比，分別采用透射電鏡(TEM)、掃描電鏡（SEM）、激光粒度散射儀等對 ABZ納米微粉的表觀、粒度、電位、多分散指數(shù)（PDI）等進(jìn)行表征。2、以粒徑和粒子分散狀態(tài)為參考指標(biāo)

2、，采用掃描電鏡觀察 ABZ納米微粉在超純水、磷酸鹽（PBS）緩沖液、RMPI1640完全培養(yǎng)基、RMPI1640培養(yǎng)液、0.9％氯化鈉溶液5種分散介質(zhì)中的分散狀態(tài)，并檢測其粒徑，篩選適于ABZ細(xì)胞毒理學(xué)評價的最佳分散介質(zhì)。同時采用超聲、超聲與細(xì)胞破碎超聲組合兩種分散方式分別分散ABZ納米微粉，篩選最佳超聲分散方式。并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步考察原料超聲時間為5～60 min時ABZ的粒徑變化趨勢，以確定最佳超聲時間。3、以人正常HL-7702肝

3、細(xì)胞為研究對象，采用MTT法初步評價不同濃度ABZ納米微粉對細(xì)胞產(chǎn)生的毒性。4、采用生物化學(xué)方法（酶聯(lián)免疫分析法）檢測納米級ABZ對HL-7702肝細(xì)胞中總蛋白（TP）、谷胱甘肽氧化酶(GSH-px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等生化指標(biāo)的影響，考察其氧化應(yīng)激作用。
　　結(jié)果：1、ABZ原料粉末呈不規(guī)則片狀，粒度不均；ABZ納米微粉呈不規(guī)則粒狀，分布均勻。ABZ原料的平均粒徑為1650±7.1 nm，電位為5.0±

4、2.20 mV，PDI為0.641±0.199。納米微粉的平均粒徑為370±2.13 nm，電位為-18.0±3.25 mV，PDI為0.355±0.127。經(jīng)優(yōu)化的納米沉淀技術(shù)獲得了形貌較好，粒徑較小的ABZ納米微粉。2、ABZ納米微粉在5種分散介質(zhì)中均發(fā)生了不同程度的團(tuán)聚，與基礎(chǔ)值比較粒徑普遍增大。但ABZ在PBS緩沖液、0.9%氯化鈉溶液和超純水中聚合程度相對輕微，粒徑增大幅度較小，結(jié)合細(xì)胞對生長環(huán)境的特殊要求選擇分散介質(zhì)為PBS

5、緩沖液。同時，阿苯達(dá)唑納米懸浮液采用超聲與細(xì)胞破碎超聲組合的分散方式，可較好地維持納米微粉的表征特點，最佳超聲時間為30 min。3、細(xì)胞染毒24h和48h后，各濃度ABZ原料的RCG為84%-101%之間，各濃度納米ABZ的RCG為80%-101%之間，二者細(xì)胞毒性等級均為1級。72h，各濃度ABZ原料微粉RCG為77%-93%之間，納米ABZ的RCG為75%-90%之間，濃度為0.190mmol/ L的ABZ原料微粉處理組的細(xì)胞毒性

6、為2級，濃度為0.380mmol/ L、0.190mmol/ L的納米微粉處理組的細(xì)胞毒性為2級，其余均為1級。ABZ原料與納米微粉在毒性效應(yīng)上仍屬于同一水平。4、與對照組相比，細(xì)胞染毒72h后，ABZ原料及納米微粉各濃度干預(yù)組細(xì)胞的蛋白含量并未發(fā)生明顯變化；同時，各濃度ABZ原料干預(yù)細(xì)胞后，其 GSH-px、SOD、MDA等的含量也未發(fā)生顯著性變化（P＞0.05）。高濃度納米微粉組（0.380 mmol/ L、0.190mmol/ L

7、）對細(xì)胞中GSH-px、SOD、MDA的含量具有顯著影響（P﹤0.05）。
　　結(jié)論：1、采用優(yōu)化的微粉化技術(shù)獲得了形貌較好、粒徑較小的阿苯達(dá)唑納米微粉。2、以PBS為分散介質(zhì)，采用超聲與細(xì)胞破碎超聲的分散方法可有效抑制納米微粉懸浮液的團(tuán)聚，較好的維持了納米微粉的表征特點，適宜于ABZ納米微粉的細(xì)胞毒性研究。3、兩種粉末體外對 HL-7702細(xì)胞的毒性作用均較小，ABZ原料與獲得粒徑范圍的納米微粉在毒性效應(yīng)上位于同一水平。4、阿苯