納米網(wǎng)孔n-HA-PA66-成骨細胞-VEGF組織工程骨的構(gòu)建.pdf

1、背景:臨床上大段骨缺損的修復是骨科醫(yī)師面臨的一個棘手的問題,鑒于我國社會人口結(jié)構(gòu)老齡化的出現(xiàn),骨缺損修復必將面臨更大挑戰(zhàn)。骨折部位的再血管化已被公認為是影響骨缺損修復的最關(guān)鍵因素,而血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是骨折部位促進血管再生最重要生物活性分子之一。以外源目的基因?qū)氚屑毎麨樘卣鞯幕蛑委熓侄?可以作為把具有治療作用的生物活性分子傳遞給局部組織或細胞的有效工具,

2、常常用于骨科基礎(chǔ)研究領(lǐng)域。把外源VEGF基因?qū)牍钦劬植拷M織或細胞,以使得VEGF基因在骨缺損局部持續(xù)、有效的表達和釋放,對骨折愈合延遲或不愈合的治療具有巨大的應(yīng)用前景。
　　 目的:分離、提取、培養(yǎng)及鑒定兔成骨細胞;優(yōu)化重組真核表達質(zhì)粒pEGFP/hVEGF165轉(zhuǎn)染兔成骨細胞的條件,構(gòu)建出大量的VEGF目的基因修飾的種子細胞;利用基因工程技術(shù)、組織工程技術(shù)構(gòu)建納米網(wǎng)孔n-HA/PA66/成骨細胞/VEGF組織工程骨。

3、　　 材料與方法:采用組織塊培養(yǎng)法分離、提取、培養(yǎng)兔成骨細胞;改良鈣鈷染色法行堿性磷酸酶染色以鑒定兔成骨細胞。采用脂質(zhì)體法將外源性VEGF基因?qū)氤晒羌毎?構(gòu)建出VEGF基因修飾的新型種子細胞。采用沉淀種植技術(shù),將種子細胞種植在網(wǎng)孔n-HA/PA66支架材料上構(gòu)建新型組織工程骨;采用細胞計數(shù)法了解種子細胞在支架材料上的生長增殖情況;采用ELISA法檢測組織工程骨體外表達分泌VEGF活性分子的情況。
　　 結(jié)果:成功地培養(yǎng)出兔成

4、骨細胞;優(yōu)化了重組真核表達質(zhì)粒pEGFP/hVEGF165轉(zhuǎn)染兔成骨細胞的條件,在2.5ul脂質(zhì)體和1.2ug質(zhì)粒條件下取得了滿意的轉(zhuǎn)染效率,構(gòu)建了大量VEGF基因修飾的新型種子細胞;證實了脂質(zhì)體和質(zhì)粒都能影響轉(zhuǎn)染效率,且二者之間的交互作用亦能顯著影響成骨細胞的轉(zhuǎn)染率。成功地構(gòu)建了的組織工程骨,檢測到組織工程骨在體外夠持續(xù)較高量表達和分泌VEGF分子達9d,表達高峰時間為第3d,證實了支架材料和種子細胞具有較好相容性。
　　 結(jié)