CyPA與ROS在OX40-OX40L受體配體軸介導的動脈粥樣硬化中的作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　 本研究觀察頸動脈粥樣硬化斑塊模型小鼠體內血脂水平，OX40、親環(huán)素A(CyPA)的表達及CD4+OX40+淋巴細胞內活性氧(ROS)水平的變化，并探討OX40/OX40L相互作用對淋巴細胞CyPA分泌及ROS水平的影響。
　　 方法：
　　 本研究分體內體外兩部分。體內實驗以C57BL/6J小鼠為實驗對象，采用高脂飲食及頸動脈硅膠圈植入法快速制作頸動脈粥樣斑塊模型;體外實驗分離培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細胞進

2、行研究。蘇木精-伊紅（HE）染色分析頸動脈斑塊形成情況與病理形態(tài)學變化。免疫組化檢測頸動脈粥樣斑塊中CyPA表達，WesternBlot檢測體內外脾臟淋巴細胞內CyPA的表達及分泌水平，流式細胞術分別檢測體內外脾臟淋巴細胞中OX40、CD4+OX40的表達及OX40+、CD4+OX40+細胞內的ROS水平。
　　 結果：
　　 (1)與正常對照組相比，實驗組小鼠血清TC、LDL明顯升高，HDL則明顯降低，TG變化無統(tǒng)計學

3、意義。
　　 (2)正常對照組頸動脈管壁呈半透明狀，無脂紋和斑塊形成，內膜光滑平整，彈力板完整。模型小鼠患側頸動脈有明顯斑塊形成，含大量泡沫細胞，富含脂質，可見膽固醇結晶，彈力板變性、斷裂。
　　 (3)無論正常C57BL/6J小鼠，還是頸動脈粥樣硬化模型小鼠，OX40+、CD4+OX40+淋巴細胞內ROS水平明顯高于OX40-、CD4+OX40-細胞。
　　 (4)與對照小鼠相比，模型小鼠脾臟中OX40+細胞數(shù)

4、明顯增加，P＜0.05;CD4+OX40+細胞數(shù)增加，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　 (5)與正常對照組比較，實驗組C57BL/6J小鼠頸動脈粥樣硬化斑塊及脾臟淋巴細胞中可見大量CyPA表達。
　　 (6)體外培養(yǎng)的脾臟淋巴細胞中anti-OX40刺激OX40-OX40L軸后，淋巴細胞OX40表達和ROS水平明顯上調，且隨時間的增加而增加，36h達最大差異。Anti-OX40L特異性抑制OX40-OX40L軸能明顯降低淋巴細

5、胞OX40表達和ROS水平，36h達最大差異。
　　 (7)體外培養(yǎng)的脾臟淋巴細胞中anti-OX40刺激OX40-OX40L軸后6h，即可在培養(yǎng)液內檢測到CyPA，利用Anti-OX40L特異性抑制OX40-OX40L軸后可明顯抑制CyPA分泌。
　　 結論：
　　 (1)植入頸動脈硅膠圈及喂養(yǎng)高脂飼料可以快速誘導C57BL/6J小鼠產(chǎn)生頸動脈粥樣硬化斑塊。
　　 (2)OX40的表達有助于提升細胞內R