支氣管哮喘患者外周血OX40-OX40L的表達(dá)及其臨床意義的研究.pdf

1、目前，支氣管哮喘已經(jīng)成為最常見的慢性氣道疾病之一，隨著工業(yè)化的發(fā)展，哮喘的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，目前已成為全球性的社會衛(wèi)生問題，有關(guān)支氣管哮喘發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制，其中T細(xì)胞是最關(guān)鍵的樞紐性調(diào)節(jié)細(xì)胞，T細(xì)胞的過度活化及輔助性T細(xì)胞亞群（Thl/Th2亞群）數(shù)目和(或)功能比例失衡成為支氣管哮喘發(fā)病的最重要的免疫學(xué)異常，然而T細(xì)胞的活化及Thl/Th2亞群的失衡涉及多種T細(xì)胞表面分子，研究發(fā)現(xiàn)，協(xié)同刺激分子OX40/OX40L是近年來較受

2、重視的一個分子，主要表達(dá)在活化的CD4+T和CD8+T細(xì)胞表面，現(xiàn)有的研究證實(shí)，CD4+T細(xì)胞在支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色，而協(xié)同刺激信號分子OX40/OX40L可促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的活化、增殖及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌，在包括支氣管哮喘在內(nèi)的多種炎性和自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
　　近年來，支氣管哮喘患者外周血中淋巴細(xì)胞表面OX40/OX40L的高表達(dá)已經(jīng)受到關(guān)注，然而，哮喘患者外周血淋巴細(xì)胞表面OX40/

3、OX40L和血清可溶性O(shè)X40L的過度表達(dá)與哮喘的氣道炎癥水平及臨床病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性尚未有明確的研究，本研究通過檢測支氣管哮喘患者外周血淋巴細(xì)胞表面OX40/OX40L及血清可溶性O(shè)X40L（sOX40L）的表達(dá)水平，并探討了和其他哮喘炎癥指標(biāo)及臨床參數(shù)的關(guān)系，初步研究發(fā)現(xiàn)哮喘患者在急性發(fā)作期其外周血淋巴細(xì)胞表面存在OX40/OX40L表達(dá)水平的異常升高，并可有血清sOX40L的高分泌，且與呼出氣一氧化氮（FeNO）、外周血嗜酸性粒

4、細(xì)胞（EOS）計數(shù)和總免疫球蛋白（IgE）的表達(dá)水平具有明顯的相關(guān)性，我們希望通過進(jìn)一步研究揭示該信號分子的表達(dá)水平與支氣管哮喘發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，探討OX40/OX40L是否可以成為新的衡量哮喘患者免疫細(xì)胞活化、炎癥水平及臨床病情嚴(yán)重程度的參考指標(biāo)；及以O(shè)X40/OX40L信號途徑為作用靶點(diǎn)，為過敏性支氣管哮喘的臨床治療提供一種新的免疫治療的可能性。
　　【目的】檢測支氣管哮喘患者外周血淋巴細(xì)胞表面OX40/OX40L表達(dá)水平及血

5、清sOX40L的表達(dá)含量并探討它們的臨床意義。
　　【方法】收集2011年11月-2012年6月在蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院初診未經(jīng)正規(guī)治療的并處于急性發(fā)作期的支氣管哮喘患者65例（急性發(fā)作組），其中男性31例，女性34例，年齡16-70(平均年齡44.1±14.38)歲，其中合并過敏性鼻炎者20例，吸煙者15例。入組患者均符合2008年中華醫(yī)學(xué)會制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)和全球哮喘防治創(chuàng)議(GINA2010版)哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[10,11]，且支

6、氣管舒張試驗(yàn)皆陽性。急性發(fā)作組的患者依據(jù)其臨床癥狀、體征等綜合評估病情的嚴(yán)重程度將其分為：輕度（15例）、中度（33例）、重度（17例）、極重度(0例)，并對所有急性發(fā)作組患者進(jìn)行回訪作為緩解組（緩解組），同時設(shè)正常對照組30例（正常對照組），其中男性11例，女性19例，年齡20-60（平均年齡40.50±10.84）歲，急性發(fā)作組、緩解組及正常對照組三組的年齡、性別均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測30例正常對

7、照組和65例初次發(fā)作并且支氣管舒張試驗(yàn)為陽性的支氣管哮喘患者外周血淋巴細(xì)胞表面OX40/OX40L的表達(dá)水平，用肺功能儀檢測急性發(fā)作期患者的FEV1%的水平，記錄患者哮喘控制測試（ACT）評分，并檢測所有入組者外周血嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計數(shù)及血清總免疫球蛋白E（總IgE）的水平，用用一氧化氮分析儀檢測所有哮喘患者FeNO水平，并緩解組哮喘患者的上述指標(biāo)，比較患者的外周血淋巴細(xì)胞表面OX40/OX40L的表達(dá)情況及肺功能的改善情況、AC

8、T評分、外周血EOS計數(shù)等臨床指標(biāo)的變化。采用ELISA方法檢測所有入組哮喘患者及30例對照組血清sOX40L的表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】
　　1.急性發(fā)作組支氣管哮喘患者外周血淋巴細(xì)胞表面CD4+OX40+/CD4+、CD14+OX40L+/CD14+和CD19+OX40L+/CD19+的表達(dá)水平均顯著高于緩解組(均P<0.05)和正常對照組(均P<0.01)。緩解組支氣管哮喘患者的CD4+OX40+/CD4+、CD14+O

9、X40L+/CD14+和CD19+OX40L+/CD19+表達(dá)水平較急性發(fā)作組均有所下降，部分患者可降至正常水平，但平均水平仍高于正常對照組(均P<0.05)；急性發(fā)作組患者外周血淋巴細(xì)胞表面CD8+OX40+/CD8+的表達(dá)水平與緩解組相比較無明顯差異性改變，也與正常對照組的表達(dá)水平相當(dāng)，(P>0.05)。急性發(fā)作組哮喘患者外周血中CD4+T細(xì)胞表面存在CD4+OX40L+的高表達(dá)，并顯著高于正常對照組(P<0.05)，急性發(fā)作組血清

10、sOX40L的表達(dá)水平較緩解組和對照組(P<0.05)明顯升高，并且在重度哮喘患者血清中的含量明顯高于中度和輕度患者(P<0.05)；
　　2.相關(guān)性分析顯示，在急性發(fā)作組哮喘患者CD4+OX40+/CD4+的表達(dá)水平與FeNO的水平、外周血EOS的計數(shù)、總免疫球蛋白E(IgE)呈顯著正相關(guān)(r=0.76,P<0.01;r=0.77,P<0.01;r=0.38,P<0.05)，與患者的FEV1%、ACT評分無明顯相關(guān)性(r=-0.

11、13,P>0.05;r=0.10,P>0.05)，且與患者的吸煙狀況、性別及有無過敏性鼻炎均無明顯相關(guān)性（均P>0.05）。急性發(fā)作組患者的FeNO的表達(dá)水平與外周血EOS計數(shù)正相關(guān)(r=0.719,P<0.05)。急性發(fā)作組哮喘患者外周血中CD14+OX40L+/CD14+和與其FeNO的水平顯著正相關(guān)(r=0.39,P<0.01)，急性發(fā)作組哮喘患者的CD19+OX40L+/CD19+的表達(dá)水平與患者的EOS、FeNO、總IgE等指

12、標(biāo)均具有顯著相關(guān)性(r=0.377,P<0.05;r=0.379,P<0.05;r=0.372,P<0.05)，并與患者的ACT評分及FEV1%顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.32,P<0.05;r=-0.48,P<0.01)。此外，急性發(fā)作組哮喘患者外周血的sOX40L的表達(dá)水平與患者外周血中EOS計數(shù)、FeNO的水平及FEV1%等臨床指標(biāo)亦具有顯著相關(guān)性(r=0.431,P>0.05,r=0.395,P<0.05,r=-0.48,P<0.01

13、)。急性發(fā)作組患者CD4+T細(xì)胞表面高表達(dá)的CD4+OX40+與其表面CD4+OX40L+的表達(dá)水平無明顯相關(guān)性(r=0.03,P>0.05)。
　　【結(jié)論】支氣管哮喘患者在急性發(fā)作期外周血淋巴細(xì)胞表面存在協(xié)同刺激分子OX40/OX40L的異常高表達(dá)和血清sOX40L表達(dá)含量的顯著增加，二者與急性發(fā)作期哮喘患者的FeNO、外周血EOS計數(shù)以及肺功能等臨床指標(biāo)具有顯著的相關(guān)性，并與患者病情的嚴(yán)重程度明顯相關(guān)，提示該協(xié)同刺激信號分子可