共刺激分子CD40-CD40L和OX40-OX40L在乳腺癌中的表達及其生物學意義.pdf

1、該課題以乳腺癌為研究對象,探討CD40、OX40、OX40L等相關(guān)分子在甩腺癌細胞上的表達及其臨床意義,并在體外以rhCD40L為激動劑研究CD40信號對乳腺癌細胞株生物學行為的影響,為臨床的運用提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ);并對OX40L進行了基因克隆、表達和生物學特性研究,為研制具有自身知識產(chǎn)權(quán)的鼠抗人單克隆抗體和開展相關(guān)研究提供了實驗手段.一、CD40及相關(guān)分子在乳腺癌中的表達及其生物學意義.該研究采用了免疫組織化學方法對58例乳腺癌石

2、蠟切片CD40分子的表達進行檢測,發(fā)現(xiàn)正常乳腺組織不表達或弱表達CD40分子,而在乳腺癌細胞中均有一定程度的表達,陽性表達率分別為37.9％,與正常乳腺組織的表達有顯著性差異(P<0.01).組化結(jié)果還顯示,58例乳腺癌有21例P53陽性表達(36.2％),與乳腺癌腫瘤分化程度、瘤塊大小有關(guān)(P<0.05),與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05).VEGF分子在各種病理類型腫瘤中高表達(81％),基表達與乳腺癌腫瘤瘤塊大小有關(guān)(P<0.0

3、5),與分化程度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05),同時也與CD40、P53分子表達無明顯相關(guān)性.二、CD40信號對乳腺癌細胞株生物學行為的影響.兩株高表達CD40的乳腺癌細胞MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞,經(jīng)rhCD40L激發(fā)后,其HLA-DR分子有不同程度的上調(diào),腫瘤細胞自身高表達CD44和CD54可通過與各自相應配體結(jié)合,穩(wěn)定細胞間接觸,增強免疫原性和促進T細胞活化.同時,TR-PCR結(jié)果顯示腫瘤上皮細胞經(jīng)CD4

4、0激發(fā)后T細胞活化和趨化因子RANTES的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào),推測其編碼的蛋白可能參與了對T細胞的趨化和活化.三、人OX40L基因克隆、表達及生物學特性研究.該部分研究在克隆OX40L基因的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了pcDNA3.1-OX40L質(zhì)粒,從而轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細胞L929,成功構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細胞L929-OX40L,并進行相關(guān)的生物學特性研究.四、OX40、OX40L分子在乳腺癌中的表達及其生物學意義.免疫組化的結(jié)果表明OX40、OX40L分子不僅表

5、達在乳腺癌浸潤性淋巴細胞上(資料未顯示),也異常表達在乳腺腫瘤細胞上,陽性表達率分別為82.7％、53.4％,與正常乳腺組織的不表達或弱表達有顯著性差異(P<0.01).對OX40、OX40L陽性過表達與乳腺癌多項臨床指標相關(guān)性進行了分析,表明OX40、OX40L在乳腺癌中的陽性表達均與腫瘤瘤塊大小(P<0.05)有關(guān),二者表現(xiàn)相反的趨勢.OX40、OX40L表達均與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05).因此,OX40、OX40L可作為區(qū)