SGT及其相關(guān)蛋白功能的研究.pdf

1、SGT能夠與熱休克蛋白家族的Hsp70和Hsc70相互作用并調(diào)節(jié)其分子伴侶活性，而Hsp70和Hsc70的分子伴侶活性可以拮抗熱休克、血清饑餓、化療藥物等引起的細胞凋亡。為了弄清SGT是否也參與了細胞凋亡的過程，首先建立了SGT超表達的SMMC-7721穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，用放線菌酮(CHX)處理穩(wěn)轉(zhuǎn)空載體的SMMC-7721和穩(wěn)轉(zhuǎn)SGT的SMMC-7721細胞后，分別用PI染色，AnnexinV和PI雙染，DNA片段化降解檢測，凋亡小體分析，

2、Hoechest染色觀察均證實SGT可以促進CHX誘導的7721細胞凋亡，進一步的研究表明這種促凋亡作用是Caspase依賴的，SGT可以促進Caspase家族蛋白的活化并將其底物PARP裂解，進一步的免疫熒光試驗表明超表達SGT可使部分P53定位到線粒體。為了進一步探討SGT的功能我們應(yīng)用酵母雙雜交的方法以SGT為誘餌篩選人胎肝cDNA文庫鑒定出PIAS為它的一個新的結(jié)合蛋白，接下來用GST-pulldown、免疫共沉淀，以及激光共聚

3、焦的方法證實了二者在體內(nèi)和體外均可相互作用。 　　β1，4半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(GalTⅠ)是一個最早克隆的糖基轉(zhuǎn)移酶，長期以來被認為是一個管家基因，GalTⅠ是SGT的一個相互作用蛋白，Ets轉(zhuǎn)錄因子家族的成員EIAF可調(diào)控其基因的轉(zhuǎn)錄。本文研究了Ets家族的另一成員Ets-1可否調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。我們采用熒光素酶報告基因的方法證實Ets-1可激活GalTⅠ報告基因的表達，并具有量效關(guān)系。我們又采用突變分析法確定GaTⅠ啟動子-215至-139