番茄病程相關(guān)蛋白NP24的功能研究.pdf

1、植物病害問題是影響農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)的一大難題。番茄作為世界上栽培最為普遍的果蔬之一，受病害影響也相當(dāng)嚴(yán)重。傳統(tǒng)防治措施如改善栽培措施對(duì)防治病害的能力是有限的。而化學(xué)防治帶來(lái)環(huán)境污染問題，藥物殘留對(duì)人類健康也造成了潛在威脅。因此，通過(guò)轉(zhuǎn)基因手段獲得抗病能力強(qiáng)的番茄新品種，可以克服傳統(tǒng)育種周期長(zhǎng)，物種隔離等問題，為番茄選育及種質(zhì)資源的優(yōu)化開辟了新道路。NP24作為病程相關(guān)蛋白PR5家族中的一員，其生物學(xué)功能、植物抗病性分子機(jī)制、抗病防衛(wèi)基因

2、調(diào)控的研究較多，尤其是它們與植物抗病性的關(guān)系引起了強(qiáng)烈關(guān)注。因此對(duì)該基因的克隆和功能驗(yàn)證將對(duì)番茄選育具有重要價(jià)值。本研究中以野生型番茄為材料，克隆了NP24基因，分析了它的組織表達(dá)模式，并利用生物學(xué)軟件分析及預(yù)測(cè)了它的生物學(xué)功能及進(jìn)化關(guān)系。同時(shí)，構(gòu)建了該基因的超表達(dá)載體和干擾載體，通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化分別獲得了超表達(dá)和干擾的轉(zhuǎn)基因株系。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴成功克隆NP24。NP24含有718個(gè)核苷酸的開放閱讀框，編碼247個(gè)氨基酸

3、，屬于PR5蛋白家族的類甜味蛋白。⑵組織和時(shí)空特異表達(dá)模式。利用RT-qPCR定量檢測(cè)了野生型番茄中不同組織器官[根（R）、莖（S）、葉（L）、花（FL）、果0（IM0）、果10（IM10）、果20（IM20）、果30（IM30）、綠熟（MG）、破色（Br）、橘黃果（YF）、紅果（RF）]中NP24的表達(dá)情況，結(jié)果表明該基因在根和果實(shí)中表達(dá)較高，破色期達(dá)到最高。⑶超表達(dá)及干擾轉(zhuǎn)基因植株的獲得。本研究成功構(gòu)建了NP24超表達(dá)載體和干擾載體