加熱致小鼠睪丸生精障礙相關(guān)蛋白質(zhì)及其功能的研究.pdf

1、精子發(fā)生是一個連續(xù)的細胞分裂分化過程，包括精原細胞分裂增殖、精母細胞減數(shù)分裂和精子形成三個主要階段。精子發(fā)生過程涉及染色體數(shù)目的減半、遺傳重組、染色質(zhì)重塑及濃縮、精子頂體和尾部的形成等復(fù)雜的變化過程，所有這些高度有序的過程均需要相關(guān)蛋白質(zhì)進行精確地調(diào)節(jié)。分離和鑒定與精子發(fā)生相關(guān)的蛋白質(zhì)并探討其相關(guān)功能對于揭示男性生殖的分子調(diào)控機制及臨床男性不育癥的診治具有重要的理論和實踐意義。 為了研究小鼠睪丸局部短暫加熱導(dǎo)致小鼠生精障礙的分子

2、機制，我們運用蛋白質(zhì)組學(xué)研究常用的技術(shù)手段—雙向凝膠電泳(two-dimensionalelectrophoresis，2-DE)和質(zhì)譜(massspectrometry,MS)分離和鑒定小鼠睪丸加熱后發(fā)生改變的蛋白質(zhì)。首先我們創(chuàng)建了含有小鼠睪丸雙向凝膠電泳參考膠的符合聯(lián)盟標準的數(shù)據(jù)庫，在參考膠上有504個通過肽質(zhì)量指紋譜鑒定的蛋白點，點擊膠上的蛋白點可鏈接到對應(yīng)的蛋白質(zhì)條目，同時還可得到蛋白質(zhì)的鑒定信息，并可鏈接到SWISS-PROT

3、或NCBI蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫，另外，數(shù)據(jù)庫支持復(fù)雜的查詢功能，該公共數(shù)據(jù)庫為研究正常小鼠睪丸功能和小鼠睪丸病理提供了有價值的資源；其次，我們采用類似的方法分析了小鼠睪丸局部加熱后不同時間點(0.5h，2h，6h，12h，2d，14d和40d)小鼠睪丸蛋白質(zhì)表達譜的動態(tài)變化，分離到了125個加熱后表達豐度發(fā)生顯著性改變的蛋白點，經(jīng)和數(shù)據(jù)庫中參照膠比較后，鑒定了其中的59個蛋白點；最后，我們對59個蛋白點中的兩類蛋白質(zhì)Heterogeneou