Sa抗原相關(guān)蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、Sa抗原／抗Sa抗體系統(tǒng)是近十余年來(lái)發(fā)現(xiàn)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis，RA)的血清學(xué)指標(biāo)，對(duì)RA高度特異，并且和病情嚴(yán)重程度相關(guān)。對(duì)Sa抗原／抗Sa抗體系統(tǒng)的研究有助于推對(duì)其在臨床的應(yīng)用和闡明RA的發(fā)病機(jī)制。 本研究以陰離子交換層析法從新鮮人胎盤組織提取含有Sa抗原的人胎盤提取物(Human Placenta Extracts，HPE)，用Sa陽(yáng)性病人血清進(jìn)行免疫印跡法檢測(cè)抗Sa抗體為相對(duì)分子量5000

2、0(和)55000印跡陽(yáng)性條帶。對(duì)30例健康對(duì)照血清和6例各種風(fēng)濕病標(biāo)準(zhǔn)血清的抗Sa抗體檢測(cè)均陰性。檢測(cè)155例各種風(fēng)濕病患者血清(RA7l例、強(qiáng)直性脊柱炎11例、銀屑病關(guān)節(jié)炎7例、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎7例、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎4例、骨性關(guān)節(jié)炎5例、風(fēng)濕性多肌痛6例、痛風(fēng)6例、系統(tǒng)性紅斑狼瘡7例、干燥綜合征10例、炎性肌病8例、混合性結(jié)締組織病4例、白塞病6例、成人Still病3例)，抗Sa抗體對(duì)RA的診斷敏感性和特異性分別為47.9％和95.2％

3、，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為89.5％和68.4％。 本研究以質(zhì)譜研究Sa抗原的生化本質(zhì)。切取抗Sa抗體陽(yáng)性印跡條帶對(duì)應(yīng)的膠上條帶，胰蛋白酶膠內(nèi)酶解，高效液相色譜一電噴霧一離子阱串聯(lián)質(zhì)譜鑒定，SEQUIEST程序檢索NCBI NR數(shù)據(jù)庫(kù)，鑒定出目標(biāo)蛋白質(zhì)為波形蛋白(vimerltin)。 為進(jìn)一步確認(rèn)目標(biāo)蛋白質(zhì)，本研究對(duì)人胎盤提取物進(jìn)行雙向電泳，免疫印跡法檢測(cè)抗Sa抗體，得到Sa抗原的相對(duì)分子量(約50 000)和等電

4、點(diǎn)(約5.0)信息，與波形蛋白相符合。 本研究在大腸桿菌重組表達(dá)人波形蛋白，但免疫印跡法檢測(cè)其抗體對(duì)RA的診斷敏感度低(36.6％)，特異性差(83.3％)，與抗Sa抗體的符合率低(Kappa=0.316)，說(shuō)明兩者抗原性存在較大差異。 本研究繼而對(duì)重組人波形蛋白進(jìn)行了瓜氨酸化修飾，檢測(cè)抗體發(fā)現(xiàn)其抗原性顯著改變?？构习彼峄ㄐ蔚鞍卓贵w對(duì)診斷RA的敏感性和特異性分別為49.3％和86.9％，與抗Sa抗體的一致性較高(Kap