人精子產(chǎn)生的免疫球蛋白G及其相關(guān)功能研究.pdf

1、背景和目的：
　　近年來，不少研究揭示除了經(jīng)典途徑免疫細胞（包括B淋巴細胞和漿細胞）能產(chǎn)生免疫球蛋白G（IgG）外，腫瘤細胞、睪丸的生精細胞和胎盤滋養(yǎng)層細胞等也能夠自身產(chǎn)生IgG。這些由其它非經(jīng)典免疫細胞產(chǎn)生的IgG（特別是非對稱IgG）已經(jīng)被早期多個科研團隊證實可能與腫瘤細胞的免疫逃逸機制及胎兒免受母體異體排斥有關(guān)。本課題組前期研究已經(jīng)證實，正常人的精子細胞能夠產(chǎn)生并分泌出IgG。而正常人精子細胞所產(chǎn)生IgG的功能，目前并不清楚

2、。
　　本研究（1）通過從正常人精子中提取細胞總蛋白，過重組蛋白 G層析柱，分離并提純得到人精子細胞的IgG；（2）通過間接 ELISA法，證明正常人精子所產(chǎn)生的IgG中含有非對稱性IgG，并計算出其在精子總IgG中所占比例為22.71％；（3）應用免疫蛋白印跡法，揭示正常人精子IgG能夠與不同組織來源（如胎盤，腫瘤，正常人血漿）的對稱性和非對稱性IgG相互作用；（4）通過免疫組織化學或者免疫細胞化學法，顯示正常人精子IgG能夠與

3、人外周血中提取的中性粒細胞相互作用。
　　材料與方法：
　　1研究對象標本來源于汕頭大學醫(yī)學院臨床醫(yī)學系的在讀的健康的男性大學生、研究生和汕頭大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院生殖中心精子標本檢測正常的男性患者。標本量305例，平均年齡35歲。（采樣獲汕大醫(yī)學院醫(yī)學倫理委員會批準）
　　2細胞或組織里面IgG的提取按重組蛋白G Agarose試劑盒的操作步驟將胎盤組織細胞，腫瘤組織細胞，和精子細胞中所含的IgG進行提取。
　

4、　3對稱性IgG和非對稱性IgG的分離按Con A Sepharose?4B試劑盒的操作步驟，將胎盤組織細胞，腫瘤組織細胞中提取的免疫球蛋白G分為對稱性的IgG和非對稱性的IgG。
　　4生物素微量蛋白標記按AnaTag? Biotin微量蛋白標記盒的操作步驟將已分離好的精子總IgG、胎盤細胞或腫瘤細胞來源的對稱性或非對稱性IgG標記上生物素，以用作免疫蛋白印跡或者免疫組化中的一抗。
　　5酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測精子I

5、gG濃度按檢測人IgG的免疫過氧化物酶法試劑盒步驟，測出精子總IgG的濃度，用一定量的精子總蛋白過Con A4 B層析柱，再測出分離收集到的對稱性IgG的濃度，從而可間接算出精子非對稱IgG在總IgG中所占的比例。
　　6銀染法（Sliver staining）檢測從組織和精子中提取出的IgG純度。
　　7免疫印跡法(Western blot, WB)探究與精子所產(chǎn)生的IgG相互作用的蛋白質(zhì)類型。
　　8免疫組織化學法