C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的表達(dá).pdf

1、目的：精子發(fā)生是精原干細(xì)胞自我更新和高度分化的一系列復(fù)雜過(guò)程。此過(guò)程涉及到數(shù)以千計(jì)的基因通過(guò)程序化的表達(dá)在特定階段編碼蛋白而完成，并發(fā)揮特定功能。因此，特定基因獨(dú)特的時(shí)空表達(dá)模式在調(diào)節(jié)精原干細(xì)胞早期發(fā)育及自我更新和分化過(guò)程中起著非常關(guān)鍵的作用。本課題通過(guò)研究C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的表達(dá)情況，探討C2cd4d基因與精子發(fā)生可能存在的關(guān)聯(lián)。
　　方法：（1）采用石蠟切片免疫熒光組織化學(xué)方法檢測(cè)65日齡大鼠睪丸組織中C

2、2cd4d(Them5)的蛋白表達(dá)；（2）通過(guò)飼養(yǎng)2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65日齡的Wistar雄性大鼠。采用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠早期發(fā)育睪丸組織中C2cd4d基因的mRNA在不同時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。
　　結(jié)果：成功提取2-65日齡的雄性Wistar大鼠睪丸組織RNA和總蛋白。將RNA反轉(zhuǎn)成cDNA，做Real-time PCR

3、，觀察了不同時(shí)間點(diǎn)的C2cd4d基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。在mRNA水平中，觀察C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的轉(zhuǎn)錄的表達(dá)情況：大鼠出生后2-65天mRNA表達(dá)模式呈波浪式變化，出生后第2天開(kāi)始逐漸上升，到第6天達(dá)到相對(duì)高值，直到第8天數(shù)值變低。從第10天開(kāi)始迅速線性上升，12天,16天達(dá)到最高值，然后開(kāi)始逐漸下降，直到第30天下降到最低值。30天之后開(kāi)始緩慢上升，上升到第55、60天達(dá)到相對(duì)高值又開(kāi)始下降，第65天達(dá)到相對(duì)低值。其中6

4、、12、16、55、60日齡大鼠睪丸組織mRNA表達(dá)有顯著增加。其中12、16日齡大鼠睪丸組織mRNA表達(dá)最高。在蛋白水平中，熒光免疫組化結(jié)果顯示C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中的所有細(xì)胞都表達(dá)，但在接近管腔的成熟精子細(xì)胞和管腔與邊緣的中間處的精母細(xì)胞表達(dá)居多。
　　結(jié)論：C2cd4d基因表達(dá)與精子發(fā)生有相關(guān)性，C2cd4d基因在大鼠早期發(fā)育睪丸組織中一直有表達(dá)，主要表達(dá)于精原干細(xì)胞的增殖，減數(shù)分裂尤其是第一次減數(shù)分裂及成