雌性大鼠染As2O3后F1代睪丸發(fā)育及vasa基因表達的研究.pdf

1、目的：通過孕前三氧化二砷（As2O3）染毒8周雌性SD大鼠，受孕后，觀察子代的睪丸結構變化及vasa的表達，探討雌性大鼠孕前As2O3染毒后對F1代雄性生殖發(fā)育的影響，以期為砷中毒患者下一代生殖健康研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：48只成年SD雌性大鼠隨機分為三組，每組16只，以灌胃方式分別給予大鼠雙蒸水為A組、As2O3溶液0.75 mg/kg/d為B組，1.5 mg/kg/d為C組，每天染砷一次，連續(xù)灌胃8周，建立慢性As2O3

2、染毒 SD雌性大鼠動物模型，雌雄（2:1）合籠受孕。各組分別取17.5天胎鼠和出生后24h內新生鼠進行胚胎總數(shù)、活胎、死胎及吸收胎的計數(shù)，稱重，鑒別雌雄；取睪丸做以下檢測：1.H-E染色觀察睪丸組織形態(tài)結構；2.透射電鏡觀察睪丸精原細胞超微結構；3.免疫組織化學法檢測VASA蛋白的表達；4. qRT–PCR檢測vasa mRNA的相對表達。
　　結果：1.各組F1代數(shù)量：B與A組相比P＞0.05，無差異；C與A組、B與C組相比，均

3、P<0.05，有差異；2.各組F1代重量：17.5天胎鼠重量，兩兩比較，P<0.01有顯著差異；新生鼠重量B與A組比較P＞0.05，無差異，C與A組比較，P<0.05，有顯著性差異，B與C組比較P＞0.05，無差異；3.HE染色鏡下可見：17.5天胎鼠 A組睪丸生精索排列、形態(tài)規(guī)則，生精索內前精原細胞排列緊密，體積大、細胞核大而圓，胞質較少，B、C組睪丸生精索排列紊亂、索間結締組織增多，索內前精原細胞排列逐漸松散、體積減小。新生鼠睪丸

4、A組生精索排列、形態(tài)規(guī)則，在同一生精索內可見處于不同階段大小不等的精原細胞排列緊密，測量各組生精索直徑，兩兩比較，P<0.01，有顯著差異；測量各組睪丸精原細胞直徑，兩兩比較，P<0.01；測量各組睪丸精索間面積B與A組比較，有差異P<0.05，C與A組比較，有顯著性差異P<0.01，B組與C組比較有顯著性差異P<0.01，隨染砷劑量的增加生精索直徑、精原細胞直徑逐漸減小，生精索間面積逐漸增大；4.電鏡可見：17.5天胎鼠A組睪丸組織前

5、精原細胞呈橢圓形，細胞膜清晰，細胞體積大，核大呈圓形、橢圓形胞質較少，胞質內細胞器僅見線粒體和粗面內質網(wǎng)，線粒體呈圓形或長橢圓形，與胞質間的邊界清晰，線粒體嵴完整平行排列，基質中見線粒體顆粒分布，電子密度比細胞質高；B組前精原細胞胞質內見線粒體稍腫大，少數(shù)線粒體電子密度減低；C組觀察前精原細胞胞質內大量線粒體腫脹，體積增大，基質中見線粒體顆粒分布減少，電子密度降低，呈空泡狀壞死，少數(shù)線粒體破裂，線粒體嵴斷裂，與胞質間的分界模糊不清，粗面

6、內質網(wǎng)明顯減少。新生鼠 A組睪丸組織精原細胞胞質內可見大量線粒體，圓形或橢圓形，線粒體顆粒分布均勻，電子密度比細胞質高，與胞質間的界清晰，線粒體嵴完整平行排列，粗面內質網(wǎng)清晰可見，細胞間可見明顯的細胞連接；B組精原細胞胞質內線粒減少并松散，呈不規(guī)則形，少量線粒體體積增大，電子密度減低，個別線粒體嵴斷裂，呈空泡狀； C組精原細胞胞質內大量線粒體腫脹，體積明顯增大，呈不規(guī)則形，電子密度降低，線粒體嵴斷裂并減少，呈空泡狀壞死，個別線粒體破裂，

7、與胞質間的分界模糊不清，粗面內質網(wǎng)少見；5.免疫組織化學檢測：17.5天胎鼠睪丸內各組均未見VASA蛋白表達；新生鼠各組睪丸生精索內精原細胞可見 VASA蛋白表達，隨染砷劑量增加而表達逐漸下調，作組間兩兩比較，均 P＜0.01，有顯著差異；6. qRT–PCR技術檢測：17.5天胎鼠睪丸前精原細胞各組均有vasa mRNA表達，作組間兩兩比較，均有統(tǒng)計學意義；新生鼠睪丸精原細胞各組均有vasa mRNA表達，作組間兩兩比較，P＜0.01