小鼠睪丸發(fā)育過程睪丸特異基因表達與不育的研究.pdf

1、目的：不育癥是一種多病因疾病，其中男性因素造成的不育大約占所有不育癥的50％。臨床上，男性不育癥被分為原因明確性和原因不明性，即原發(fā)性不育，兩種類型。其中原發(fā)性不育癥是指患者的全部檢查均正常，不但致病的根本原因不明，甚至連表面原因也未找到，在臨床診斷中約占75％。目前認為，原發(fā)性不育極有可能與遺傳因素有關(guān)。臨床上尚缺少在基因?qū)用嫔蠈Σ挥Y的檢測診斷，如果事先能確知哪些基因缺陷，那么就可以針對不同的缺陷選擇治療方案。因此篩選和發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致男性

2、不育的基因也是進行基因治療的基礎(chǔ)。找到表達異?；?，從基因水平制定無創(chuàng)傷男性不育癥患者分類的分子遺傳學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，指導(dǎo)治療。 方法：⑴十三個年齡組的小鼠睪丸組織各取一只，液氮凍存，用Trizol Reagent提取組織總RNA，并測濃度。⑵使用Promega的反轉(zhuǎn)錄試劑盒，50μL RT體系，2μg RNA，去RNA酶水定容至50μL。26℃PCR儀孵育過夜。用β—actin的引物擴增各個年齡階段的小鼠睪丸的cDNA，調(diào)整cDNA

3、濃度。⑶利用電子消減雜交的手段獲得小鼠睪丸組織特異表達的基因約500個，經(jīng)鑒定，其中339個基因與人類同源。我們設(shè)計并合成此339個基因的引物，在小鼠此十三個年齡階段的睪丸組織中擴增這339個基因。⑷取各年齡組小鼠睪丸組織，固定于4％多聚甲醛中，常規(guī)脫水，透明，石蠟包埋，制成5μm石蠟切片，PAS染色。 結(jié)果：①在各個發(fā)育階段的睪丸中均表達，且亮度均勻一致，即表達量相同；②在各個發(fā)育階段的睪丸中均表達，但亮度不一致，即表達量不同