Basigin1-CD147在癌發(fā)生中的作用研究.pdf

1、癌發(fā)生或腫瘤發(fā)生是正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變成癌細(xì)胞的致癌過(guò)程。癌發(fā)生是細(xì)胞水平、基因水平和表觀遺傳水平發(fā)生改變而特化的進(jìn)程，最終重新編程細(xì)胞導(dǎo)致不受控制的細(xì)胞分裂，從而形成惡性腫瘤。
　　Basigin（Bsg）也稱為白細(xì)胞分化抗原147（cluster of differentiation147,CD147），其蛋白質(zhì)通過(guò)basigin基因編碼。CD147分子是免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily,IgSF

2、）的一員。CD147分子在正常組織中的表達(dá)主要局限于生殖道、腦部、眼部和肌肉。然而，CD147分子可被重新激活并表達(dá)在不同類型的腫瘤組織中，包括腦瘤、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌和肝癌等，而且發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的侵襲有關(guān)。同時(shí)，CD147分子被認(rèn)為是腫瘤診斷和預(yù)后的分子標(biāo)志物。CD147分子還被認(rèn)為是瘧原蟲(chóng)結(jié)合人血紅細(xì)胞必需的受體。
　　自從人類和小鼠基因組計(jì)劃完成以來(lái)，人們對(duì)于小鼠遺傳學(xué)性質(zhì)和規(guī)模的理解發(fā)生了巨大的轉(zhuǎn)變。對(duì)由化學(xué)誘導(dǎo)或

3、靶向基因技術(shù)產(chǎn)生的突變基因進(jìn)行高通量分析的新技術(shù)得以發(fā)展，使得人們更好地理解哺乳動(dòng)物的基本生物學(xué)特性，更為重要的是創(chuàng)造新的或改進(jìn)動(dòng)物模型來(lái)研究人類疾病。轉(zhuǎn)基因小鼠的基因組包括除了正?；蛑獾耐庠椿?，這一外源基因則是利用重組DNA技術(shù)構(gòu)建的。將純化的DNA顯微注射到受精卵單細(xì)胞期的原核中，之后移植到代孕母鼠體內(nèi)。轉(zhuǎn)基因隨機(jī)整合到基因組中（通常以多拷貝頭尾串狀排列的方式），并作為一個(gè)孟德?tīng)栠z傳性狀傳遞，轉(zhuǎn)基因原代小鼠得以建立品系并穩(wěn)定遺

4、傳。
　　我們前期的研究證實(shí)了CD147分子通過(guò)TGF-β信號(hào)通路促進(jìn)了上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并且在轉(zhuǎn)錄水平受到Slug調(diào)節(jié)，以及CD147分子在體內(nèi)水平促進(jìn)了肝癌形成。然而，得出的這一結(jié)論并未通過(guò)遺傳工程小鼠模型得到證實(shí)。為此，有必要使用轉(zhuǎn)基因小鼠模型探討CD147分子在癌發(fā)生中的作用。
　　我們研究的第一個(gè)目的是在體外水平證實(shí)CD147分子的過(guò)表達(dá)是否促進(jìn)了細(xì)胞的惡性表型。雖然CD147分子已被報(bào)道在多種上皮來(lái)源的腫瘤細(xì)胞

5、中異常表達(dá)，參與了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲行為，但是其在腫瘤形成即癌發(fā)生中的功能卻不是很清楚。我們研究的第二個(gè)目的是構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠模型來(lái)分析Basigin1/CD147的功能。
　　研究分為兩部分：
　　第一部分：CD147過(guò)表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞惡性表型的功能研究。我們利用本科室已建立的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CD147分子的QZG細(xì)胞和CHO細(xì)胞，并進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證。在體外水平進(jìn)行軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞接觸抑制喪失實(shí)驗(yàn)和

6、細(xì)胞凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果表明，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CD147分子的細(xì)胞克隆形成能力、侵襲能力、抗凋亡能力均增強(qiáng)，并且出現(xiàn)了接觸抑制喪失現(xiàn)象。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CD147分子至QZG細(xì)胞和MCF10A細(xì)胞中，檢測(cè)癌基因H-ras和抑癌基因PTEN在mRNA水平的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，H-ras表達(dá)升高而PTEN表達(dá)降低。這些結(jié)果表明，CD147過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞惡性表型。
　　第二部分：Basigin1/CD147轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立。我們構(gòu)建攜帶綠色熒