Huwe1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、Huwe1(HECT, UBA and WWE domain containing1)，是一個(gè)含有HECT域的E3泛素連接酶，泛素連接酶是泛素化發(fā)生過(guò)程中必不可少的三個(gè)關(guān)鍵酶之一。泛素化是指在泛素激活酶E1、結(jié)合酶E2和泛素連接酶E3等一系列酶共同作用下，泛素分子對(duì)蛋白底物進(jìn)行特異的修飾，在蛋白降解、功能調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。而Huwe1就是這么一種泛素連接酶。含Hect結(jié)構(gòu)域的泛素連接酶，則被認(rèn)為是癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)因子。

2、作為含Hect結(jié)構(gòu)域E3泛素連接酶的Huwe1也一直被認(rèn)為是癌癥發(fā)生的重要調(diào)節(jié)因子，但是人們對(duì)其在增殖、凋亡、癌癥發(fā)生發(fā)展中所起的作用一直有不同看法:因?yàn)镠uwe1編碼的蛋白巨大(500KD)，導(dǎo)致長(zhǎng)期以來(lái)一直未能完全克隆全長(zhǎng)基因，編碼蛋白的功能也無(wú)法確定。直到2005年兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室同時(shí)克隆出Huwe1基因的全長(zhǎng)，確認(rèn)其為E3泛素連接酶，并發(fā)現(xiàn)了其作用的底物。但是兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室發(fā)表的文章中對(duì)其在增殖、凋亡、癌癥發(fā)生中所起的作用就有了不同看法。

3、后來(lái)陸續(xù)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其作用底物包括Mcl-1、p53、N-MYC、C-MYC、組蛋白、CDC6等，這其中既有抑癌基因又有癌基因。并且在人癌癥標(biāo)本中，研究結(jié)果也存在很大爭(zhēng)議:胃癌、前列腺癌、乳腺癌等組織中，Huwe1表達(dá)升高，提示Huwe1可能促進(jìn)癌癥發(fā)生;而在畸胎瘤細(xì)胞表達(dá)明顯偏低，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤系中Huwel發(fā)生突變，提示Huwe1可能是抑癌基因。越來(lái)越多的研究沒(méi)有使得Huwe1具體功能得到合理闡述，反而使問(wèn)題更加撲朔迷離。因此Huwe1

4、的具體功能有待進(jìn)一步研究，闡述這一問(wèn)題將對(duì)相關(guān)癌癥發(fā)病機(jī)制等有重要意義。卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)癌癥惡性化及死亡率很高的疾病，但是關(guān)于Huwe1在卵巢癌中功能的研究卻很少，這使得卵巢癌成為研究Huwe1在癌癥發(fā)生、發(fā)展中作用的理想對(duì)象。
　　研究表明約90％的卵巢癌起源于覆蓋卵巢的上皮細(xì)胞，卵巢癌中最常見(jiàn)的遺傳學(xué)變異是c-Myc、K-ras基因擴(kuò)增以及P53突變等。鑒于此我們利用表達(dá)K-ras，c-Myc和沉默p53基因的慢病毒注射至

5、Huwe1(flop)小鼠的卵巢囊中，試圖模擬卵巢癌發(fā)生的過(guò)程。但是Huwe1(flop)小鼠的卵巢囊存在缺陷型裂口，會(huì)導(dǎo)致病毒液泄露。因此我們改變策略，通過(guò)分離、病毒感染Huwe1(flop)小鼠卵巢上皮細(xì)胞（Mose細(xì)胞），使其惡性轉(zhuǎn)化，建立Huwe1敲除的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞株Mose-cre（Huwe1-）和Huwe1未敲除的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞株Mose-creER(Huwe1+)，模擬卵巢癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程。兩種細(xì)胞株建立后，我們對(duì)兩種細(xì)胞株