河蟹溶菌酶的基因結(jié)構(gòu)和功能研究.pdf

1、河蟹養(yǎng)殖業(yè)是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的支柱產(chǎn)業(yè)之一。目前，隨著河蟹養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和養(yǎng)殖密度的增加，各種病害嚴(yán)重阻礙養(yǎng)蟹業(yè)可持續(xù)發(fā)展。河蟹隸屬于無(wú)脊椎動(dòng)物甲殼動(dòng)物門，無(wú)獲得性免疫，依賴固有免疫抵抗外界病源微生物的入侵。我們?cè)诤有分蝎@得很多免疫相關(guān)基因，本論文主要對(duì)溶菌酶基因結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行研究。
　　溶菌酶是一種重要的免疫效應(yīng)分子，廣泛分布于多種物種中。它能夠通過(guò)催化肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和殼糊精中N-乙酰糖胺殘基間的1，4-β鏈的水解，

2、而破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁。
　　本實(shí)驗(yàn)采用RACE和RT-PCR技術(shù)從河蟹的cDNA文庫(kù)中克隆溶菌酶基因，利用生物學(xué)軟件進(jìn)行溶菌酶基因的結(jié)構(gòu)特征及系統(tǒng)發(fā)育分析。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)和原核表達(dá)技術(shù)，研究河蟹溶菌酶基因在鰻弧菌刺激下的表達(dá)特征及其免疫功能。
　　河蟹溶菌酶的cDNA全長(zhǎng)為831bp，編碼141個(gè)氨基酸的蛋白。序列分析表明河蟹溶菌酶基因預(yù)測(cè)該蛋白的等電點(diǎn)約為3.95，預(yù)測(cè)該蛋白分子量為15.72kDa。Signa

3、lP軟件分析顯示河蟹溶菌酶有一個(gè)16個(gè)氨基酸的信號(hào)肽和一個(gè)Destabilase結(jié)構(gòu)域。其Destabilase結(jié)構(gòu)域在分子結(jié)構(gòu)和功能上與其他i型溶菌酶的Destabilase結(jié)構(gòu)域有一定相似性，可能是其在無(wú)脊椎動(dòng)物中的一種原始形式。同源性分析表明，河蟹溶菌酶與斑節(jié)對(duì)蝦溶菌酶的相似性最高。鰻弧菌刺激可以顯著地誘導(dǎo)河蟹溶菌酶基因的mRNA的表達(dá)。河蟹重組溶菌酶蛋白對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌鰻弧菌和真菌假絲酵母、畢赤酵母生長(zhǎng)具有抑制活性，而對(duì)革蘭氏陽(yáng)