通過轉(zhuǎn)雙基因探索提高長春花文多靈生物合成的研究.pdf

1、藥用植物長春花是次生代謝研究中的一種重要模式植物。長春花含有130多種重要的萜類吲哚生物堿，其中雙吲哚生物堿長春堿和長春新堿具有抗腫瘤功效，單吲哚生物堿阿瑪堿、文多靈和長春質(zhì)堿具有降血壓、降血糖和降血脂的作用，但它們?cè)谔烊婚L春花植株中含量極低或較低，遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求，使其價(jià)格不菲或較為昂貴。文多靈不僅本身具有藥用價(jià)值，而且是雙吲哚生物堿合成的直接前體，能夠用于雙吲哚生物堿的體外半合成。本課題擬通過遺傳轉(zhuǎn)化來大幅度提高長春花中文多靈的含

2、量，以期增加雙吲哚生物堿的積累，同時(shí)為體外半合成抗癌生物堿提供原料，該研究有望為抗癌藥物供不應(yīng)求的現(xiàn)狀提供有效解決途徑。
　　 本研究利用豌豆核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶小亞基的TP將文多靈合成途徑關(guān)鍵基因d4h和dat的過表達(dá)產(chǎn)物定位于葉綠體中，以實(shí)現(xiàn)文多靈在葉綠體中的區(qū)域性合成和積累。通過嘗試不同的侵染方法，建立了長春花愈傷組織和毛狀根的遺傳轉(zhuǎn)化方法，目前已經(jīng)獲得了單轉(zhuǎn)D4H基因DAT基因以及雙轉(zhuǎn)D4H和DAT基因的愈傷組織