茅巖莓茶中二氫楊梅素的純化及功能研究.pdf

1、本研究以湖南張家界茅巖莓茶葉為原料，采用乙醇作為提取劑，回流提取二氫楊梅素。采用超濾分離、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20純化的方法對(duì)茅巖莓二氫楊梅素粗提物進(jìn)行分離純化，得到單體二氫楊梅素，并用高效液相法檢測(cè)其純度，最后研究二氫楊梅素對(duì)多種細(xì)菌的抑菌作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用溶劑提取法回流提取茅巖莓中二氫楊梅素，提取劑為70％乙醇溶液。以二氫楊梅素提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)，考察三個(gè)因素（提取時(shí)間，提取溫度

2、，液料比）對(duì)二氫楊梅素提取率的影響，通過(guò)中心點(diǎn)試驗(yàn)確定了茅巖莓中二氫楊梅素的最佳提取工藝：提取時(shí)間為75min，提取溫度為67℃，料液比(g/mL)為1:28。采用此工藝提取二氫楊梅素，提取率可達(dá)17.55%。經(jīng)紫外法測(cè)定，粗提物中二氫楊梅素的純度為32.75%。⑵采用聚砜膜（截留分子量為10000D）對(duì)茅巖莓二氫楊梅素提取液進(jìn)行超濾分離。以膜通量和二氫楊梅素純度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)，考察了超濾時(shí)間、料液濃度、料液溫度、壓力對(duì)超濾

3、效果的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)得到最佳的分離工藝參數(shù)：料液濃度為0.5 mg/mL、料液溫度為35℃、超濾壓力為0.2 MPa。采用此工藝，超濾的初始膜通量達(dá)到0.215 mL/(cm2·min)，二氫楊梅素純度由32.75%提高到60.1%。隨后采用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20對(duì)超濾分離后得到的二氫楊梅素產(chǎn)品進(jìn)行進(jìn)一步的純化，收集與標(biāo)準(zhǔn)品圖譜相近的洗脫液，濃縮干燥，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，分離出單體二氫楊梅素。經(jīng)檢測(cè)，單體二氫

4、楊梅素純度為95.1%。⑶采用牛津杯法研究了二氫楊梅素對(duì)多種細(xì)菌的抑制作用，并以廣譜抗生素硫酸慶大霉素作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果顯示，二氫楊梅素對(duì)各供試菌均具有抑制作用，其對(duì)各供試菌抑制作用強(qiáng)弱依次為沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草桿菌、志賀氏菌、大腸桿菌、蠟樣芽胞桿菌、禽多殺性巴氏桿菌。采用二倍稀釋法測(cè)定二氫楊梅素的最小抑菌濃度（MIC），其對(duì)八種細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）分別為沙門(mén)氏菌0.12 mg/mL、金黃色葡萄球菌0.24

5、mg/mL、綠膿桿菌0.24 mg/mL、枯草桿菌0.24 mg/mL、志賀氏菌0.24 mg/mL、大腸桿菌0.47 mg/mL、蠟樣芽胞桿菌0.94 mg/mL、禽多殺性巴氏桿菌1.88 mg/mL。隨著溫度的升高，二氫楊梅素的抑菌活性略有下降，但是下降幅度并不明顯，表明二氫楊梅素具有良好的熱穩(wěn)定性。在酸性和弱堿性條件下，二氫楊梅素的抑菌活較強(qiáng)，而在中性和強(qiáng)堿性條件下，二氫楊梅素的抑菌活較弱。添加食品防腐劑山梨酸和苯甲酸，可增強(qiáng)二氫