基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)定量分析組蛋白翻譯后修飾.pdf

1、組蛋白翻譯后修飾(Post-translational modifications，PTMs)使組蛋白的結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，功能更為完善，作用更為專一，具有十分重要的生物學(xué)意義。了解細(xì)胞內(nèi)組蛋白PTMs的變化規(guī)律，對于揭示疾病機(jī)制，以及發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物和藥物靶標(biāo)的具有重要的意義。然而由于細(xì)胞中組蛋白的PTMs種類繁多且動(dòng)態(tài)范圍廣，導(dǎo)致其相關(guān)研究極具挑戰(zhàn)性。當(dāng)前生物質(zhì)譜結(jié)合同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在組蛋白修飾定量分析方面具有很大的潛力。

2、r>　　 細(xì)胞中組蛋白的乙?；揎梾⑴c包括基因表達(dá)在內(nèi)的多種細(xì)胞過程。研究表明組蛋白賴氨酸殘基上的乙酰化的缺失或冗余與腫瘤細(xì)胞的形成和侵襲密切相關(guān)。組蛋白去乙酰化酶(HDAC)可催化去除組蛋白的乙?；?，是近年來腫瘤治療研究的新型靶點(diǎn)，因此HDAC抑制劑已經(jīng)成為一類新型的靶向抗癌藥物。
　　 第一部分工作，采用體內(nèi)穩(wěn)定同位素標(biāo)記(stable isotope labeling by aminoacids in cell cult

3、ure，SILAC)策略結(jié)合高分辨質(zhì)譜技術(shù)，建立了組蛋白修飾的定量分析方法；定量分析了一種新的抗腫瘤藥物L(fēng)argazole對直腸癌細(xì)胞(HCT116)中組蛋白賴氨酸乙酰化水平的調(diào)控；鑒定了組蛋白其它修飾在Largazole作用下的變化規(guī)律。
　　 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells，iPS)是通過體細(xì)胞重編程獲得的具有胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ES)特性的多

4、能干細(xì)胞，可以分化成任何組織和器官，因此iPS在再生醫(yī)學(xué)和疾病機(jī)理等方面極具應(yīng)用價(jià)值。然而，目前iPS技術(shù)仍然存在致癌性、效率低等一系列問題。有研究表明，組蛋白PTMs對干細(xì)胞的多能性維持以與自我更新具有重要意義。因此，研究iPS細(xì)胞與ES細(xì)胞在組蛋白PTMs上的異同點(diǎn)，可以為深入了解iPS細(xì)胞的表觀遺傳特征以及與ES細(xì)胞生物學(xué)差異提供一定的依據(jù)。
　　 第二部分工作，針對干細(xì)胞的特點(diǎn)，采用體外化學(xué)同位素標(biāo)記和LC-MS/MS技