聚賴氨酸樹枝狀分子的制備及其負載納豆激酶用于靶向溶血栓的研究.pdf

1、納豆激酶(NK)作為一種新型的溶栓劑，因具備直接溶栓、激活體內(nèi)細胞產(chǎn)生尿激酶和內(nèi)源組織型纖溶酶原激活劑等優(yōu)勢引起了研究者們的高度重視。然而，NK作為蛋白酶類藥物仍存在一些缺點，如容易受到外部環(huán)境的影響、對溫度和pH的變化較為敏感。與傳統(tǒng)的溶栓治療相比，利用藥物載體包埋溶栓藥物已經(jīng)吸引了研究者們的注意。經(jīng)藥物載體包埋N K之后，能夠更好地保護NK不失活，并提高其耐溫度和pH的穩(wěn)定性。聚賴氨酸樹枝狀分子具有可控的尺寸、可功能化的表面官能團、

2、良好的水溶性、生物降解性及生物相容性，被認為是一種理想的藥物載體。因此，本學位論文使用賴氨酸為主要原料，制備了一系列不同代數(shù)的聚賴氨酸樹枝狀分子，研究了其作為藥物載體包埋NK在溶血栓方面的性質(zhì)。為了實現(xiàn)靶向性溶血栓的目的，引入了磁靶向和血栓部位靶向，前者是借助外部磁場達到靶向血栓部位的目的；后者是利用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD肽)與血小板GP I Ib/I IIa受體特異性結(jié)合的能力，從而具備血栓靶向性。本學位論文主要包括以下兩個

3、方面：
　　1.通過發(fā)散-收斂法制備了二代、三代和四代聚賴氨酸樹枝狀分子(PLLD Gn)，使其與溶栓藥物NK復配形成納米復合物。當NK與PLLD G4的摩爾比為1:30時，形成的NK/PLLD納米復合物具有最高的NK酶活(高達117％)。熒光光譜研究結(jié)果表明，NK與PLLD之間的作用力為氫鍵作用和范德華力，并且NK/PLLD納米復合物具有較好的耐溫度和pH的穩(wěn)定性。體外溶栓研究結(jié)果表明，在12h內(nèi)NK/PLLD納米復合物溶栓率達

4、到50%，與游離NK相比，NK/PLLD納米復合物能起到緩釋NK的作用。溶血實驗和MTT實驗研究結(jié)果表明，PLLD具有更低的細胞毒性和良好的生物相容性。
　　2.使用共沉淀法制備了Fe3O4磁性納米顆粒，用3-氨丙基三乙氧基硅烷(AP TES)修飾后，再用三代聚賴氨酸樹枝狀分子(P LLD)修飾，最后用RGD修飾得到新型磁性納米顆粒Fe3O4-PLLD-RGD，再通過離子吸附作用將NK固定到Fe3O4-PLLD-RGD表面，得到F

5、e3O4-PLLD-RGD/NK。體外靶向研究結(jié)果表明，經(jīng)RG D修飾的磁性納米顆粒具有好的血栓靶向能力和磁靶向能力。體外溶栓研究結(jié)果表明，在2.5h內(nèi)，F(xiàn)e3O4-PLLD-RGD/NK磁性納米顆粒溶栓率達到50%；在5.5h內(nèi)，游離NK和Fe3O4-PLLD/NK磁性納米顆粒的溶栓率均達到50%。以上結(jié)果表明，F(xiàn)e3O4-PLLD-RGD/NK磁性納米顆粒具有良好的血栓靶向能力和快速溶栓能力。溶血實驗和MTT實驗研究結(jié)果表明，F(xiàn)e3