干酪乳桿菌SY13粘附屬性研究.pdf

1、干酪乳桿菌在制作功能性酸乳、發(fā)酵豆乳、干酪和乳酸菌飲料當(dāng)中廣泛應(yīng)用。由于干酪乳桿菌優(yōu)良的發(fā)酵風(fēng)味和良好的功能性，其在食品研究與開(kāi)發(fā)中占有重要地位。干酪乳桿菌SY13分離自傳統(tǒng)乳制品。經(jīng)研究表明，干酪乳桿菌SY13具有良好的抗氧化功能。粘附在人體腸道中的益生菌能夠調(diào)節(jié)腸道菌群，抑制腸道病原物生長(zhǎng)。益生菌在人體腸道粘附定植是其進(jìn)一步發(fā)揮益生功能的前提。對(duì)于乳酸菌的粘附能力測(cè)定主要集中于細(xì)胞研究，但是，單純的細(xì)胞培養(yǎng)與現(xiàn)實(shí)的腸道環(huán)境相去甚遠(yuǎn)。

2、本文針對(duì)干酪乳桿菌SY13在BALB/c小鼠腸道粘附屬性的研究，開(kāi)發(fā)了在BALB/c小鼠腸道內(nèi)干酪乳桿菌的檢測(cè)方法，并對(duì)干酪乳桿菌SY13在BALB/c小鼠腸道粘附規(guī)律進(jìn)行了測(cè)定和粘附規(guī)律原因的解析。具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　(1)本論文采用TaqMan-MGB RT-PCR來(lái)實(shí)現(xiàn)干酪乳桿菌SY13在BALB/c小鼠腸道內(nèi)的檢測(cè)。引物設(shè)計(jì)的模板選取的是干酪乳桿菌的特有基因CasX，DNA標(biāo)準(zhǔn)品的制作是通過(guò)目標(biāo)片段連接T載體，藍(lán)白篩選

3、而制得。引物的特異性是通過(guò)篩選遺傳相近乳桿菌擴(kuò)增陰性來(lái)證明的。方法的標(biāo)準(zhǔn)方程曲線是Y=-3.531gC+45.28（R2=0.998，Y代表CT，C代表標(biāo)準(zhǔn)品DNA濃度，PCR的擴(kuò)增效率是92.011％），試驗(yàn)方法的檢出限是102copies/μL。經(jīng)引物的特異性驗(yàn)證和后續(xù)的小鼠試驗(yàn)證明，方法可行。
　　(2)本論文通過(guò)BALB/c小鼠體內(nèi)試驗(yàn)測(cè)定干酪乳桿菌SY13腸道粘附能力。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，干酪乳桿菌SY13在小鼠的盲腸和結(jié)腸中分布

4、較多，空腸分布較少，回腸中未發(fā)現(xiàn)目標(biāo)菌。本研究從干酪乳桿菌SY13的灌胃時(shí)間，宿主年齡和益生元的影響三個(gè)方面對(duì)干酪乳桿菌SY13的粘附能力進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，灌胃時(shí)間，宿主年齡和益生元都對(duì)干酪乳桿菌SY13的粘附能力有影響。灌胃時(shí)間越長(zhǎng)，干酪乳桿菌SY13的數(shù)量越多，在宿主腸道內(nèi)的保留時(shí)間也越長(zhǎng)（單次灌胃，保留時(shí)間是3天;28天灌胃后，保留時(shí)間大于7天）。益生元能夠改變干酪乳桿菌SY13在小腸中的分布。同時(shí)灌胃益生元和干酪乳桿菌SY1

5、3后，在回腸中檢測(cè)到了目標(biāo)菌。在灌胃干酪乳桿菌SY13后，青年組小鼠中的回腸中，并未檢測(cè)到目標(biāo)菌，但是在老齡組中，卻能檢測(cè)到。研究結(jié)果表明灌胃時(shí)間越長(zhǎng)，有益生元輔助，越有利于干酪乳桿菌SY13在小腸中的粘附。
　　(3)本論文對(duì)干酪乳桿菌SY13在小鼠腸道內(nèi)的粘附規(guī)律的原因進(jìn)行了探究。選取了部分試驗(yàn)小鼠盲腸腸內(nèi)容物的基因組DNA進(jìn)行了16S rRNA擴(kuò)增子的測(cè)序試驗(yàn)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，青年組小鼠的腸道核心微生物菌群數(shù)量大于老齡組（青年組1

6、45左右，老齡組115左右）。灌胃干酪乳桿菌SY13、低聚果糖和乳果糖后，alpha多樣性指數(shù)升高，宿主腸道內(nèi)的微生物多樣性升高;經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，灌胃后，試驗(yàn)組小鼠盲腸中的梭菌類(lèi)明顯下降，擬桿菌類(lèi)明顯上升，腸道菌群結(jié)構(gòu)明顯改善。
　　本研究所開(kāi)發(fā)的干酪乳桿菌TaqMan-MGB探針檢測(cè)方法為干酪乳桿菌的檢測(cè)提供新的參考。本文從粘附理論的角度，為干酪乳桿菌SY13的功能性評(píng)價(jià)以及為其后期開(kāi)發(fā)功能性食品或者發(fā)酵生產(chǎn)飼料等工業(yè)應(yīng)用提供了部分