鄰位連接技術(shù)

1、Proximity Ligation Assayproximity ligation assay(鄰位連接技術(shù),PLA)：一種高靈敏度的蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。鄰位連接技術(shù)(proximityligationassay,PLA)被建立。該技術(shù)采用核酸適體(aptamer)或單/多克隆抗體-核酸復(fù)合物作為鄰位連接探針(proximityprobes)。當(dāng)一對鄰位探針同時識別同一個目標(biāo)蛋白分子時，它們將在空間位置上相互臨近，通過連接反應(yīng)形成一段可擴(kuò)

2、增的 DNA 標(biāo)簽序列，該標(biāo)簽序列能夠反映待測蛋白的種類及濃度。該技術(shù)將對蛋白質(zhì)的檢測轉(zhuǎn)變?yōu)閷?DNA 核酸序列的檢測，實現(xiàn)了特殊蛋白質(zhì)的檢測,定量及定位。美國俄亥俄州立大學(xué)的研究人員近日開發(fā)出一種新技術(shù)，能同時觀察細(xì)胞中的基因數(shù)量和蛋白表達(dá)。此技術(shù)能夠詳細(xì)分析基因狀態(tài)以及相應(yīng)蛋白表達(dá)之間的關(guān)聯(lián)，并更透徹地了解癌癥及其他復(fù)雜疾病。該成果發(fā)表在《神經(jīng)腫瘤》（Neuro-Oncology）上。這種新技術(shù)稱為熒光原位基因蛋白分析（fluore

3、scent in situ gene protein assay）。它將傳統(tǒng)的熒光原位雜交（FISH）與原位鄰位連接分析（in situ proximity ligation assay，簡稱 PLA）相結(jié)合。PLA 分析采用核酸適體（aptamer）或單/多克隆抗體-核酸復(fù)合物作為鄰位連接探針。當(dāng)一對鄰位探針同時識別同一個目標(biāo)蛋白分子時，它們將在空間位置上相互臨近，通過連接反應(yīng)形成一段可擴(kuò)增的 DNA 標(biāo)簽序列，該標(biāo)簽序列能夠反映待測

4、蛋白的種類及濃度。文章的作者之一，俄亥俄州立大學(xué)的 Arnab Chakravarti 博士表示：“據(jù)我所知，這是目前第一個技術(shù)，能讓我們了解同一細(xì)胞中的基因活性和相應(yīng)蛋白表達(dá)。了解腫瘤中的基因和蛋白表達(dá)變化，有助于我們了解是什么驅(qū)動了腫瘤行為?！蔽恼碌耐ㄓ嵶髡撸瑏喞婉R大學(xué)副教授 Markus Bredel 及其同事首先分析了固定的人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，然后分析了石蠟包埋的人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織。在這兩個分析中，他們都發(fā)現(xiàn)了一種表皮生長因子

5、受體基因的突變形式（EGFRvIII）的過表達(dá)，并在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)了截短蛋白?？购丝贵w 抗核抗體抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）又稱抗核酸抗原抗體，是一組將自身真核細(xì)胞的各種成分脫氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和 RNA 等作為靶抗原的自身抗體的總稱，能與所有動物的細(xì)胞核發(fā)生反應(yīng)，主要存在于血清中，也可存在于胸水、關(guān)節(jié)滑膜液和尿液中?？购丝贵w在多種自身免疫病中均呈不同程度的陽性率

6、，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE，95%~100%）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA，10%~20%）、混合性結(jié)締組織病（MCTD，80%~100%）、干燥綜合癥（SS,10%~40%）、全身性硬皮病（85%~90%）、狼瘡性肝炎（95%~100%）、原發(fā)性膽汁性肝硬化（95%~100%）等，但經(jīng)皮質(zhì)激素治療后，陽性率可降低?？购丝贵w在類風(fēng)濕病人中約有 20%～50%IgG 型 ANA 呈陽性，小兒類風(fēng)濕ANA 的陽性率約 19%～35%，伴發(fā)虹膜睫狀

7、體炎者陽性率高（50%~90%），故 ANA 陽性預(yù)示類風(fēng)濕有發(fā)生慢性睫狀體炎的可能。已發(fā)現(xiàn) 75%類風(fēng)濕病人有多形核白細(xì)胞的特異性 ANA 或抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）可使白細(xì)胞核受到破壞解釋 解釋抗核抗體是一組對細(xì)胞核內(nèi)的 DNA，RNA，蛋白或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體。按其核內(nèi)各個分子的性能不同可將各 ANA 區(qū)分開來，如(一)抗 DNA 抗體，（二）抗組蛋白抗體，（三）抗非組蛋白抗體，（四）抗核仁抗體等。每一大類又因

8、不同抗原特性而再分為許多種類。因此 ANA 在廣義上是一組各有不同臨床意義的自身抗體，更確切的名稱應(yīng)為抗核抗體譜。ANA 主要存在于 IgG，也見于 IgM、IgA，甚至 LgD 及LgE 中。常見的核免疫熒光杭核抗體試驗有以下幾種圖形：（1）均質(zhì)型：核質(zhì)染色均勻一致，這種染色型常與抗組蛋白和抗 DNA 抗體有關(guān)；（2）斑點(diǎn)型：核質(zhì)染色呈斑點(diǎn)狀，抗可提取性核抗原（ENA）抗體常呈這種染色型；（3）周邊型：熒光染色圍繞在核膜周圍，它與抗

9、DNA 抗體有關(guān)；（4）核仁型：僅有核仁染色，具有抗 4-6sRNA 抗體呈現(xiàn)這種染色型；（5）著絲點(diǎn)型：在體外培養(yǎng)的細(xì)胞株（喉癌細(xì)胞）在核分裂相期時，可見到熒光染色的著絲點(diǎn)排列成特殊圖型，而在鼠肝做底物中看不到此類圖型，而被遺漏?？贵w分類 抗體分類抗核抗體的分類，由于核抗原不同，有多種不同的 ANA 。抗 DNA 抗體 抗體 抗 DNA 抗體有抗雙鏈 DNA（ds DNA）和抗單鏈(ss DNA)抗體之分。抗 ds DNA 抗體與 S

10、LE 的關(guān)系密切，且隨疾病的活動度而升降，病情好轉(zhuǎn)者其滴度多下降甚或轉(zhuǎn)陰。抗 ss DNA 抗體則與抗 ds DNA 不同，可在多種疾病出現(xiàn)，包括一些非自身免疫性疾病，如細(xì)菌和病毒感染。故在臨床上無實用價值。而抗 ds DNA 抗體被認(rèn)為是紅斑狼瘡（SLE）所特有?？?DNA 的自身抗體在 SLE 發(fā)病中起一定作用。在一些 SLE 患者，DNA 大分子存在于循環(huán)中或粘附于多種器官的微血管結(jié)構(gòu)，這些循環(huán)或器官原位抗原型 DNA 均可與循環(huán)