miRNA-146a對乙型肝炎病毒生活周期的影響及機制研究.pdf

1、目的：研究微小 RNA-146a(microRNA-146a，miR-146a）對乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）生活周期的影響及其可能機制。
　　方法：通過miRNA芯片比較HepG2.2.15細胞與HepG2細胞 miRNA表達譜差異，選擇 miR-146a為研究對象，RT-PCR驗證芯片結(jié)果。在HepG2.2.15細胞中分別轉(zhuǎn)染 miR-146a mimic和 inhibitor，RT-PCR檢測

2、HBV復(fù)制水平,ELISA和Western blot檢測蛋白水平。雙熒光素酶報告系統(tǒng)進一步驗證 miR-146a與潛在靶點 HS3ST3B1相互作用。HepG2.2.15細胞中轉(zhuǎn)染miR-146a mimic，RT-PCR和western blot分別檢測HS3ST3B1 mRNA和蛋白水平。
　　結(jié)果：（1）miRNA芯片發(fā)現(xiàn)74條miRNAs在HepG2.2.15中表達發(fā)生變化，其中29條上調(diào)，45條下調(diào), RT-PCR證實，

3、miR-146a在HepG2.2.15水平明顯高于HepG2細胞(P＜0.05)。（2）HepG2.2.15細胞轉(zhuǎn)染miR-146a mimic后，HBV復(fù)制和蛋白水平較對照組明顯升高(P＜0.05)；轉(zhuǎn)染 miR-146a inhibitor后，HBV復(fù)制和蛋白表達水平較對照組明顯降低(P＜0.05)。（3）生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn) HBV抑制因子HS3ST3B1是 miR-146a的潛在靶點，雙熒光素酶報告系統(tǒng)顯示, HS3ST3B1野生

4、型載體的報告熒光較對照組明顯下調(diào)（P＜0.05），突變預(yù)測靶位點后，HS3ST3B1突變型載體的報告熒光與對照組無明顯差異（P＞0.05）。HepG2.2.15細胞中轉(zhuǎn)染miR-146a mimic后，HS3ST3B1 mRNA水平較對照組無明顯變化（P＞0.05），HS3ST3B1蛋白水平較對照組明顯下調(diào)。
　　結(jié)論：本研究證實 miR-146a能影響 HBV生活周期，研究發(fā)現(xiàn)miR-146a可能通過作用于HBV抑制因子HS3S