ca2camcav1.2camkⅱ信號通路在阿爾茨海默病和血管性癡呆模型中的變化研究

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Ca2+/CaM/Cav1.2/CaMKⅡ信號通路在阿爾茨海默病和血管性癡呆模型中的變化研究姓名：閔冬雨申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：藥學(xué)；藥理學(xué)指導(dǎo)教師：蔡際群201204多奈哌齊是膽堿酯酶抑制劑，臨床上主要應(yīng)用于阿爾茨海默病人，改善患者的學(xué)習(xí)記憶能力，還有文獻報道多奈哌齊的預(yù)處理可以減少局灶性腦缺血的梗死面積，對谷氨酸的興奮毒性也有保護作用。這些證據(jù)表明多奈哌齊對腦組織有保護作用，但是對全腦缺血引起的學(xué)習(xí)記憶能下降

2、的改善作用未見報道，所以本實驗對全腦缺血致沙鼠認知能力下降給予多奈哌齊進行治療，并進一步探討多奈哌齊的改善作用是否與C a M K I I ／C R E B 信號通路相關(guān)。本實驗選用了國際公認的A P P ／P S l 轉(zhuǎn)基因小鼠做為阿爾茨海默病的研究模型，同時也在細胞水平進行了研究，選用的細胞模型為A p l m 誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元損傷模型。血管性癡呆模型我們選用先天腦W i l l i s 環(huán)缺失的蒙古沙土鼠，利用雙側(cè)頸動脈暫短閉塞造成

3、腦組織缺血，再用行為學(xué)檢測學(xué)習(xí)記憶能力，學(xué)習(xí)記憶能力下降的即為血管性癡呆模型。到目前為止，在A P P ／P S l 小鼠及A p l - 4 2 誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元損傷模型與沙鼠血管性癡呆模型中C a v l ．2 、C a M 、C a M K I I 、C R E B 和B D N F的表達變化以及分布變化未見系統(tǒng)的闡述，我們認為在這些模型中這幾個蛋白參與了學(xué)習(xí)記憶的減退。所以本實驗主要研究在這些模型中C a v l ．2 、C a

4、M 、C a M K I I 、C R E B 和B D N F 蛋白表達的變化以及其相互關(guān)系的變化。實驗材料和方法‘一、材料動物、試劑與儀器：健康A(chǔ) P P ／P S l 轉(zhuǎn)基因小鼠和C 5 7 8 1 ／6 小鼠，9 月齡，每個實驗組均為8 只；W i s t a r 新生鼠若干只，均為出生一天；蒙古沙土鼠，7 0 —8 0 9 ，雄性。均由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供。鼠抗C a M ( S a n t aC r u z ) ，鼠抗

5、C a r l ．2( A b e a m ) ，兔抗C a M K I I ( S a n t aC r u z ) ，兔抗p - C a M K I I ( S a n t aC r u z ) ，兔抗p - C R E B( A b e a m ) ，兔抗C R E B ( S A B ) ，兔抗B D N F ( S a n t a C r u z ) ，1 3 - a c t i n ( S a n t aC r u z )

6、；增強型化學(xué)發(fā)光液( A p p l y g e n ) ；N i s s l 液( 碧云天) ，H E 染液( 碧云天) ；F l u o 一3 ／A M ( 日本同仁) ；胰酶( 北京中杉) ，胎牛血清( 四季青) ，N e u r o b a s a l ( G i b c o ) ，B 2 7 ( G i b c o ) ；多奈哌齊( 同本衛(wèi)材) ；C M l 9 0 0U V L E I C A 冰凍切片機( 德國) ，電泳儀