適冷海洋細(xì)菌pseudoalteromonassp.mb1內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達(dá)

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文適冷海洋細(xì)菌Pseudoalteromonas sp.MB-1內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達(dá)姓名：游銀偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：汪天虹20040401適冷海洋細(xì)菌P s e u d o a l t e r o m o n a ss p ．M B —l 內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達(dá)摘要海洋適冷微生物生活在自然界的低溫環(huán)境中( O ℃或接近0 ℃) ，歷經(jīng)長(zhǎng)期的環(huán)境適應(yīng)( 高壓、高鹽、低溫、低營(yíng)養(yǎng)、低光照

2、等) ，具有特殊的遺傳和代謝特性。自海洋微生物中分離得到的酶等生物活性物質(zhì)，結(jié)構(gòu)新穎，功能獨(dú)特，是陸地生物所不具有的，其中占主導(dǎo)地位的海洋細(xì)菌所產(chǎn)的生物活性物質(zhì)種類最為豐富。長(zhǎng)期生活在低溫環(huán)境中的海洋微生物所產(chǎn)的酶大多數(shù)具有低溫催化和對(duì)熱不穩(wěn)定的特征，這些酶的最適反應(yīng)溫度在3 0 。C 左右并且在低溫下( 0 ℃一4 “ C ) 仍保持高比例的活性，因此稱為低溫酶。纖維素酶在釀酒、飼料、食品加工工業(yè)中有著廣泛的用途，研究開(kāi)發(fā)適冷海洋細(xì)菌

3、的低溫纖維素酶，既有理論意義，也有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)室從黃海的深海海底泥樣中篩選出一株產(chǎn)纖維素酶的革蘭氏陰性的桿菌M B 一1 ，它的最適生長(zhǎng)溫度為2 0 。C ，最高生長(zhǎng)溫度為4 0 ℃，在O “ C 也能生長(zhǎng)，因此是典型的適冷菌。該菌所產(chǎn)的內(nèi)切B 一1 ，4 - 葡聚糖酶的最適反應(yīng)溫度為3 5 。C ，在1 0 “ ( 2 下仍有較高的酶活，屬于適冷酶，最適反應(yīng)p H 值為6 ．0 ，屬于酸性酶。細(xì)菌的1 6 Sr D N

4、A 序列具有兩端保守，中間可變的特點(diǎn)，根據(jù)可變區(qū)可對(duì)其進(jìn)行分類鑒定，利用1 6 Sr D N A 序列鑒定細(xì)菌已經(jīng)成為一個(gè)廣泛而有效的方法。本文克隆和分析了海洋細(xì)菌M B 一1 的1 6 S r D N A 序列，將其鑒定為交替假單胞菌( P s o u d o a ] t e r o m o H 8 s ) ，命名為P s e u d o a ] t e r o m o n a ss p ．M B —l ，同時(shí)對(duì)P s e u d o

5、 a ] t e F o M o n s ss p ．M B 一1 的1 6 Sr D N A序列進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育樹分析。交替假單胞菌屬是1 9 9 5 年根據(jù)1 6 Sr D N A 序列的特點(diǎn)從交替單胞菌屬( A ] t e z ' 。m o n a s ) 中分離出來(lái)的一個(gè)屬，目前對(duì)它的研究還不多，因此，對(duì)P s e u d o a ] t e r o m o n a ss o ．M B 一1 做進(jìn)一步的研究是很有意義的。采