梨pyrusl.aflp反應(yīng)體系的建立及在品種鑒定中的應(yīng)用

1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文梨（Pyrus L.）AFLP反應(yīng)體系的建立及在品種鑒定中的應(yīng)用姓名：魯鳳娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：張玉星20040620S y s t e m E s t a b l i s h m e n t a n d A p p l i c a t i o n o f A F L PT e c h n i q u e i nf ' ，淞L ．M a j o r ：P o m o l o g yM

2、a s t e r c a n d i d a t e ：L UF e n g - j u a nS u p e r v i s o r ：P r o ￡Z H A N G Y u - x i n gA b s t r a e tA F L P m a r k e r i s an e w k i n do f t e c h n i q u e ，w h i c hi sw i d e l ya p p l i e di nt h e

3、m o l e c u l a rb i o l o g y , h i g hm a m m a la n dp l a n t s i n r e c e n ty e a r s ．T h e f i n g e r p r i n t i n ga n a l y s i sb a s e do nA F L P 、, v a sc a r r i e do u ti n4 4d i f f e r e n tp e a rc

4、u l t i v a r s ，i n c l u d i n gs i xp a i r so fs p o r t s 。T h i ss t u d ya i m e da td i s c u s s i n gt h ef e a s i b i l i t yo fA F L P a p p l y i n go nP 妒H sg e r m p l a s m ，w h i c hc o u l df i n do u

5、tt h eo w n e r s h i p o f s o m e c u l t i v a r s ，s u c h a sP i n g g u l i p e a ra n d S O o n ．T h e m a i nr e s u l t sw e r e a sf o l l o w s ：l S o m ef a c t o r s a f f e c t i n g e s t a b l i s h m e n

6、 to fA F L Pt e c h n o l o g i c a ls y s t e mh a v e b e e nt e s t e da n da n a l y z e da g a i na n da g a i n ，a n da tl a s ta m o s t e f f e c t i v es y s t e mW a s e s t a b l i s h e d 。S o m ei m p r o v

7、e df a c t o r s w e r ea s f o l l o w s ：( 1 ) t h e c o n c e n t r a t i o no ft e m p l a t eD N A 吣15 0 n ∥g t L ，t h et e m p l a t eD N A d o s a g ew a s 4 5 0 r i g ；< 2 ) i nt h ed i g e s t i o ns y s t e

8、m ，e a c h o f M s e Ia n d E c o R l w a s i n p u t3 U n i t s ，M s e IB u f f e rW a s u s e da n d r e a c t i o nt i m eW a S 5h o u r s ；( 3 ) t h em o s t a v a i l a b l el i g a s ed o s a g eW a s1 ．5 U ，t h er

9、 e a c t i o nt i m e w a s 1 0h o u r s ；( 4 ) t h ep r o d u c t s o fl i g a t i o nw a sd i l u t e dt o 5t i m e sf o rp r e a m p l i f i c a t i o n ；( 5 ) t h ep r o d u c t so f p r e a m p l i f i c a t i o nr

10、e a c t i o nw a s d i l u t e d t o5t i m e sf o r s e l e c t i v e a m p l i f i c a t i o n ．2t 0p a i r so f p r i m e r s s e l e c t e df r o m 6 4 p r i m e r c o m b i n a t i o n sw e r ei d e n t i f i e d t o

11、b eh i g hp o l y m o r p h i c 孫aw e r ea p p l i e do nA F L P a m p l i f i c a t i o ni n4 4P v r u sp l a n t s ．3 7 1 l o c iw e r eg a i n e d a m o n g w h i c h 3 0 6 l o c iw e r e p o l y m o r p h i c + A v e

12、 r a g e l o c u s n u m b e r s a m p l i f i e d b y p e rp a i r o f p r i m e r w e r e 3 7 ．1 ．3 T k f i n g e r p r i n t i n g p a t t e r n b a s e d 0 1 3 ．A F L Pw a sp r e l i m i n a r i l y e s t a b l i s h

13、 e d 。T &i d e n t i f i c a t i o n e f f i c i e n c y o f1 0p a i r s o fp r i m e rd i f f e r e d f r o me a c ho t h e r , a m o n gw h i c hM 7 ／E 5w a s a b l e t od i s t i n g u i s h 4 4 p e a r c u l t i

14、v a r s ．419 f o r m s h a d s p e c i f i cA F L P m a r k e r s w h i c h w e r e 4 8 ．2 ％o f t h e t o t a l ．5O n t h eb a s e0 fA F L P d a t aa b t a i n e df r o m t h es t u d y , c l u s t e r i n ga n a l y s i

15、 so nt h e4 4m a t e r i a l so f p e a rw e r ec a r r i e d o u t ，a n dt h et r e e d i a g r a m sw e r ee s t a b l i s h e db yw a r d ’Sm e t h o d ，t h e r e l a t i o n s h i p s w i t h i n d i f f e r e n ts y

16、 s t e m s o f P y r U S w e r e d i s c u s s e d ．6 強ee x i s t e n t d e m u r r a l o ns y s t e m a t i c s t a t u s o fP i n g g u o l i p e a r w a sd i s c u s s e d ，P i n g g u l i p e a r c l u s t e r e d t

17、o g e t h e r w i t h J i n h u a s i h a o p e a r w h i c h b e l o n g e d t o P y ㈨b r e t s c h n e i d e r i ，S Ow e c o n s i d e r e d t h a tP i n g g u o l i p e a r s h o u l d b e l o n g t ow h i t e - p e a