中藥鑒定dna分子標(biāo)記在中藥品種鑒定中的運(yùn)用

1、DNA分子標(biāo)記在中藥品種鑒定中的運(yùn)用,指導(dǎo)老師：謝冬梅老師小組成員：趙維波 劉萬冬 朱婷 周孟凡 周悅 2016年4月14日,匯報(bào)內(nèi)容,1、研究背景2、DNA分子標(biāo)記的簡(jiǎn)介3、DNA分子標(biāo)記技術(shù)方法的簡(jiǎn)介4、在中藥品種鑒定中的運(yùn)用5、小結(jié)6、展望,1 研究背景,中藥的準(zhǔn)確鑒定涉及到人民的生命安全和切身利益。傳統(tǒng)的鑒定方法存在著不同程度的局限性，近年來，隨著

2、分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，DNA 分子標(biāo)記的新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，DNA 分子標(biāo)記技術(shù)憑借著特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確、快速、微量、可靠等特點(diǎn)，在中藥品種鑒定中展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。,2 DNA分子標(biāo)記的簡(jiǎn)介,分子標(biāo)記的定義：廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的并可檢測(cè)的DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標(biāo)記是指能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異的特異性DNA片段。分子標(biāo)記的類別：根據(jù)目的基因所在細(xì)胞器的不同可分為核DNA 標(biāo)記、線粒體DNA標(biāo)記和葉綠體DNA標(biāo)記。,

3、3 DNA分子標(biāo)記技術(shù),定義：DNA分子標(biāo)記技術(shù)， 也稱DNA分子診斷技術(shù)，是指通過直接分析遺傳物質(zhì)的多態(tài)性來診斷生物內(nèi)在基因排布規(guī)律及其外在性狀表現(xiàn)規(guī)律的技術(shù)。,DNA分子標(biāo)記技術(shù)的特點(diǎn),不受組織類別、發(fā)育階段等影響。取材不受限制。不受環(huán)境影響。因?yàn)榄h(huán)境只影響基因的表達(dá)轉(zhuǎn)錄與翻譯，而不影響基因結(jié)構(gòu)。數(shù)量多且多態(tài)性高。具有共顯性，能夠鑒別純種和雜合基因。簡(jiǎn)單、快速、易于自動(dòng)化。,常用的DNA分標(biāo)記技術(shù)分類,,DNA分子標(biāo)記技術(shù)原

4、理,以RAPD為例簡(jiǎn)要介紹DNA分子標(biāo)記技術(shù)的原理、操作過程及結(jié)果分析。原理：RAPD是建立在PCR基礎(chǔ)之上的一種可對(duì)整個(gè)未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。其以基因組DNA為模板，以單個(gè)人工合成的隨機(jī)多態(tài)核苷酸序列為引物，在熱穩(wěn)定的DNA聚合酶作用下，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測(cè)多態(tài)性。擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性反映了基因組的多態(tài)性。,操作過程,結(jié)果分析,DNA分子標(biāo)記技術(shù)的運(yùn)

5、用情況,方法：以常用中藥材名稱和分子標(biāo)記技術(shù)為關(guān)鍵詞，搜索CNKI文庫中的中文文獻(xiàn)，并進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果,以PCR擴(kuò)增、測(cè)序?yàn)殍b別方法的部分常用中藥,標(biāo)記的選擇,標(biāo)記選擇是篩選用于中藥分子鑒別DNA標(biāo)記的前提。常用于植物鑒別的基因標(biāo)記序列有：rbcL、ITS、matK、psbA-trnH、trnL-trnF 動(dòng)物鑒別的片段主要用COI基因片段。,品種鑒定中標(biāo)記序列的應(yīng)用情況,4 在中藥品種鑒定中的運(yùn)用,在中藥種類的分布,在植物

6、藥中的分布,在中藥品種鑒定中的運(yùn)用,一、鑒定近緣中藥品種 相關(guān)學(xué)者對(duì)美洲東部的西洋參、三葉人參進(jìn)行基因分析后，發(fā)現(xiàn)西洋參與東亞種人參、竹節(jié)參、三七具有更近的親緣關(guān)系。二、鑒定動(dòng)物類中藥品種 DNA標(biāo)記技術(shù)不僅能對(duì)動(dòng)物藥整體、破碎的組織進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定，還能對(duì)動(dòng)物粉末、體液、分泌物、排泄物入藥的中藥或中藥制劑進(jìn)行有效的真?zhèn)舞b定。 王建云利用PCR技術(shù)準(zhǔn)確的鑒別雞內(nèi)金和鴨內(nèi)金。,在中藥品種鑒定中的運(yùn)用,三、鑒定藥材的地道性道地藥材與非

7、道地藥材物種來源、形態(tài)、顯微及化學(xué)成分等特征上具有高度相似性,因而不易鑒定，而DNA分子標(biāo)記技術(shù)從群居和分子水平上闡明藥材的地道性。陳永久利用RAPD技術(shù)研究冬蟲夏草在不同群體間遺傳分化現(xiàn)象，同一地區(qū)樣品差異甚微而不同地域樣品差異甚大。,在中藥品種鑒定中的運(yùn)用,四、鑒定中藥野生與栽培品種 栽培品種在長期的人工選擇與馴化作用，其生物性狀、品質(zhì)發(fā)生一定的變化。而市場(chǎng)上以栽培品充當(dāng)野生品的現(xiàn)象屢見不鮮，僅靠傳統(tǒng)鑒別很難區(qū)分。DNA分子標(biāo)記技

8、術(shù)則展示其良好的運(yùn)用前景。馬小等用RAPD、AFLP標(biāo)記對(duì)園參與山參的研究發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)可用于栽培品與野生品的鑒定。,5 小結(jié),現(xiàn)狀DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)在中藥鑒定及其相關(guān)研究方面具有獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用前景,但目前尚處于探索階段。各種DNA分子遺傳技術(shù)均存在一定的局限性,有待進(jìn)一步規(guī)范和完善。中藥分子鑒定實(shí)驗(yàn)中的問題①目的基因的真實(shí)性與DNA同源性②DNA分子標(biāo)記技術(shù)的穩(wěn)定性③分子生物的研究成本等。,6 展望,目前中藥DNA