棗ISSR反應體系的建立及其在新鄭棗區(qū)優(yōu)良單株早期鑒定上的應用.pdf

1、棗樹在中國有著悠久的栽培歷史，河南又是最早栽培棗樹的地區(qū)之一.為了選育優(yōu)質(zhì)豐產(chǎn)的棗樹品種，新鄭棗樹科學研究所篩選了5株棗樹優(yōu)良單株，為了探索早期鑒定優(yōu)良單株的方法，本論文選用一種簡便、快速、可靠的分子標記-ISSR技術(shù)，探討其在優(yōu)良單株早期鑒定方面的應用.其結(jié)果如下： 1、改良了棗樹葉片DNA的提取方法，提取出高質(zhì)量的棗樹基因組DNA，適用于ISSR擴增. 2、對棗樹ISSR反應體系進行了優(yōu)化，總體積15μl，引物濃度為

2、0.8μmol/L，2×TaqMastcrMix 7.5μll，45ngDNA.擴增反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性1min；50℃左右退火(隨引物不同變化)1mln；72℃延伸2mln；72℃延伸10min；40個循環(huán)；4℃保存. 3、從100條ISSR引物中篩選出15條條帶清晰、多態(tài)性豐富的引物用于基因組DNA擴增，得到93條條帶，其中多態(tài)性條帶83條，占89.3％. 4、對5株優(yōu)良單株的ISSR數(shù)據(jù)進行

3、了相似系數(shù)和聚類分析，并建立了5個優(yōu)良單株的樹狀聚類圖，品種之間的相似系數(shù)在0.43-0.81之間，以相似系數(shù)0.60為界，可以將5株優(yōu)良單株分為兩大類，1-4號為第一類，5號為第二類. 5、根據(jù)5株優(yōu)良單株的形態(tài)指標，運用最短距離法進行聚類分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)運用與ISSR的結(jié)果并不完全一致，不同之處在于ISSR法將3號和4號先分為一個亞類，1號和2號也分為一個亞類，然后再將它們四種分為一類.但是傳統(tǒng)方法是先將1號、2號、3號分為一