灰棗離體葉片高效再生體系建立的研究.pdf

1、棗（ZizyphusjujubaMill.）為鼠李科棗屬植物，是我國第一大干果樹種和最具代表性的民族果樹之一。灰棗耐干旱、瘠薄和鹽堿，抗干熱風，結果早，是優(yōu)良的鮮食和制干兼用型品種，但其也存在病蟲害嚴重，落花落果嚴重等缺陷。離體葉片再生技術是果樹細胞水平的誘變育種、變異篩選、嵌合體分離及基因轉移等方面的基礎，目前已有民勤小棗、沾化冬棗、駿棗、毛葉棗等十幾個品種的棗葉片再生體系建立成功，但未見有關灰棗離體葉片再生體系建立的報道。

2、本論文以灰棗為試材，分別通過愈傷組織分化不定芽、直接再生不定芽、不定根分化不定芽三種途徑，研究各種因素如外植體條件、基本培養(yǎng)基類型、激素種類和濃度、光照條件、添加物等對灰棗不定芽再生過程的影響，優(yōu)化各種條件，以期建立一個適合灰棗的高效、穩(wěn)定再生體系。主要實驗結論如下： （1）灰棗葉片愈傷組織的誘導宜選擇組培苗葉片為外植體；苗莖中部葉片的愈傷組織誘導率高于莖頂部和下部的葉片愈傷組織誘導率，以第3-5片深綠色，平展，大而厚的葉片為佳

3、；接種前不傷葉緣、垂直于主脈橫切3-5刀，與縱切和不切相比，愈傷組織誘導率可提高到65.44％；接種方向對葉片愈傷組織的誘導影響不顯著；暗培養(yǎng)可加速愈傷組織發(fā)生進程，適宜的暗培養(yǎng)時間為14d。葉片愈傷組織誘導的最適培養(yǎng)基為1/2MS附加6-BA0.5mg/L，2，4-D2.0mg/L，AgNO30.5mg/L，愈傷組織誘導率可達到96.67％。由葉片誘導的愈傷組織，只有黃綠色，致密的愈傷組織在分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)3代（5周轉接一次，為一代）

4、后才可分化出芽，將其切成0.5c㎡大小接種于分化培養(yǎng)基，在MS附加6-BA3.0mg/L和IBA0.2mg/L培養(yǎng)基上分化率為13.77％，且一個愈傷組織塊上只能分化出一個芽；在MS附加ZT2.0mg/L和IBA0.1mg/L培養(yǎng)基上能分化出叢生芽，分化率可達37.34％。 （2）葉片直接再生不定芽的最適培養(yǎng)基為WPM+NAA0.2mg/L+TDZ0.5mg/L；最佳外植體為灰棗組培苗中部平展，大而厚葉片；不定芽多在近葉柄處發(fā)生

5、，再生率比近葉尖處高59.74％；以近軸面接觸培養(yǎng)基接種較以遠軸面接觸培養(yǎng)基接種的再生率高16.81％；提高蔗糖濃度到40g/L可降低再生芽的玻璃化程度；適當時間的暗培養(yǎng)可以提高灰棗葉片再生能力，以10d的暗培養(yǎng)處理最佳；添加AgNO30.5mg/L葉片再生率可提高到82.25％，平均每葉片再生芽數(shù)為2.64個。 （3）灰棗組培苗葉片不定根誘導的最佳培養(yǎng)基為1/2MS附加NAA0.3mg/L和IBA2.0mg/L，誘導率為92.

6、95％，誘導的不定根乳白色，粗壯。將不定根切成0.5cm的小段接種于WPM附加TDZ1.0mg/L和NAA0.2mg/L的分化培養(yǎng)基上，分化率可達44.51％，平均每不定根再生芽數(shù)2.08個。 （4）將分別通過愈傷組織再生、直接再生和不定根再生三種途徑誘導的不定芽接種到繼代增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+KT0.5mg/L，培養(yǎng)至35d，增殖系數(shù)為3.06。 （5）將繼代增殖的再生苗切成2c