敬釗纓毛蛛毒素v與kv4.3鉀通道相互作用機(jī)制研究

1、湖南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文敬釗纓毛蛛毒素-V與Kv4.3鉀通道相互作用機(jī)制研究姓名：蔡麗君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：曾雄智20100501值) 為4 2 5 ．1n M 。J Z T X ．V 還能夠使通道的電流電壓關(guān)系曲線(xiàn)和穩(wěn)態(tài)失活曲線(xiàn)分別向去極化方向漂移大約2 9m V 和1 0 m V 來(lái)改變鉀通道亞型K v 4 ．3 的動(dòng)力學(xué)特征。突變體研究結(jié)果表明突變體W 5 A ．J Z T X ．V對(duì)K v 4

2、．3 鉀通道的抑制作用下降3 8 倍，突變體E 1 7 A ．J Z T X ．V 和K 2 7 A ．J Z T X ．V 對(duì)K v 4 ．3 鉀通道的抑制作用略有增強(qiáng)，但其他1 1 個(gè)單殘基突變體與三個(gè)剪切體( Y 1 ，1 2 9 ，1 2 8 1 2 9 ) 對(duì)K v 4 ．3 通道的抑制作用均沒(méi)有產(chǎn)生明顯的影響。由此，可以推測(cè)J Z T X - V 分子中第五位的色氨酸氨殘基是負(fù)責(zé)該毒素與K v 4 ．3 通道發(fā)生相互作用的關(guān)

3、鍵活性殘基。鑒于單殘基剪切體對(duì)通道的抑制作用沒(méi)有明顯改變，在對(duì)J Z T X ．V進(jìn)行分子改造的時(shí)候，可以考慮將位于J Z T X ．V 分子上第l 位的酪氨酸殘基和第2 9 位的異亮氨酸殘基剪切，以節(jié)省生產(chǎn)的成本。為了進(jìn)一步探索J Z T X ．V 與K v 4 ．3 通道相互作用的分子機(jī)制，運(yùn)用點(diǎn)突變的方法設(shè)計(jì)和構(gòu)建了1 2 個(gè)K v 4 ．3 通道S 1 ．S 2 片段和S 3 b ．S 4片段的胞外連接環(huán)上的單點(diǎn)突變體，為用膜片