兩種延遲整流鉀通道離子流相互作用的研究.pdf

1、背景和目的:
　　延遲整流鉀離子通道(如IKr和IKs)同一通道的不同亞基與不同通道間均存在相互作用。通過(guò)研究IKs通道內(nèi)部亞基間不同比例組合的相互作用,比較KCNQ1/KCNE1電流與野生型的IKs電流的電生理特性。對(duì)比共轉(zhuǎn)染的KCNQ1/KCNH2通道與野生型KCNQ1通道及KCNH2通道的電流特征,以進(jìn)一步揭示心律失常的發(fā)病基礎(chǔ),為其臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　第一部分磁珠標(biāo)記法測(cè)定共轉(zhuǎn)染后KCNQ1/KCNE1通道電

2、流
　　方法:
　　利用免疫磁珠陽(yáng)性標(biāo)記法制作KCNQ1/KCNE1通道表達(dá)系統(tǒng),測(cè)定通道電流的I-V曲線、穩(wěn)態(tài)激活曲線和激活時(shí)間常數(shù)等,比較其與WT-KCNQ1通道電流的區(qū)別,探討KCNQ1/KCNE1通道亞基間不同比例組合時(shí)的電流特性。
　　結(jié)果:
　　采用35mm平皿,2ug質(zhì)粒,5ul lipofectamine轉(zhuǎn)染試劑,在48-72h時(shí)細(xì)胞陽(yáng)性率可達(dá)10~15％。記錄KCNQ1/KCNE1通道電流,比較

3、亞基間不同比例組合下電流密度,在比例達(dá)到1:3時(shí)達(dá)到高峰;穩(wěn)態(tài)激活曲線與波爾茲曼方程良好擬合,V1/2及斜率(k)均比WT-KCNQ1通道的值大;滅活時(shí)間常數(shù)Tau1和Tau2均較大,滅火時(shí)間長(zhǎng);KCNQ1/KCNE1(1:3)通道的激活時(shí)間常數(shù)Tau值隨著電壓的增加而不斷增大。
　　結(jié)論:
　　1.細(xì)胞最佳的轉(zhuǎn)染配比為2ug質(zhì)粒,5ul lipofectamine轉(zhuǎn)染試劑,當(dāng)KCNQ1:KCNE1比例為1:3時(shí),此組合的電

4、流與經(jīng)典的Iks電流最接近。
　　2.所記錄的KCNQ1/KCNE1通道(α:β=1:3)電流密度比WT-KCNQ1通道大,說(shuō)明KCNE1通道蛋白的表達(dá)量與IKs電流密度成正比。
　　3.KCNQ1/KCNE1通道門控動(dòng)力學(xué)特性與WT-KCNQ1通道完全相反,卻與經(jīng)典的Iks電流一致,即表現(xiàn)出慢激活、慢滅火和基本上無(wú)失火的電流特征。
　　4.電流密度和門控動(dòng)力學(xué)的改變與KCNQ1/KCNE1通道內(nèi)部亞基間相互作用密不可

5、分。
　　第二部分WT-KCNQ1/KCNH2通道的電生理特征的研究及比較
　　方法:
　　利用免疫磁珠陽(yáng)性標(biāo)記表達(dá)系統(tǒng)記錄WT-KCNQ1/KCNH2通道電流,分別比較其與WT-KCNQ1通道及WT-KCNH2通道電流的區(qū)別,揭示不同延遲整流鉀通道間的相互作用,及與心律失常的發(fā)生機(jī)制相關(guān)。
　　結(jié)果:
　　KCNQ1/KCNH2通道在KCNQ1通道蛋白的作用下電流密度均明顯增加,且在刺激電壓20mV以上時(shí)

6、出現(xiàn)明顯的內(nèi)向整流特性;當(dāng)刺激電位為-40mV~+60mV系列脈沖刺激時(shí),通道穩(wěn)態(tài)激活曲線與波爾茲曼方程擬合效果良好,其V1/2=-0.92331±2.22338mV,k=9.58502±2.03137mV;在20mV時(shí)激活時(shí)間常數(shù)Tau值開始迅速下降,這與其峰值電流的I-V曲線相吻合。
　　結(jié)論:
　　1.KCNQ1/KCNH2鉀通道的電流密度比野生型的大,但未改變其內(nèi)向整流特性。說(shuō)明KCNQ1通道蛋白的協(xié)同作用,能明顯改