hbv能夠通過增強(qiáng)raf1的啟動(dòng)子活性提高其在hepg2.2.15細(xì)胞中的表達(dá)

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HBV能夠通過增強(qiáng)Raf1的啟動(dòng)子活性提高其在HepG2.2.15細(xì)胞中的表達(dá)姓名：田園園申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：湯華201105重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文的表達(dá)。將設(shè)計(jì)好的干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染H e p G 2 ．2 ．1 5 ，利用R T - P C R 檢測(cè)干擾質(zhì)粒的干擾效果；利用W e s t e r nb l o t 檢測(cè)干擾質(zhì)粒對(duì)R a f t 表達(dá)的影響。結(jié)果1 ．R T - P

2、 C R 結(jié)果顯示，R a i l 在H e p G 2 ．2 ．1 5 細(xì)胞中的表達(dá)量是其在H e p G 2 細(xì)胞中的2 ．1 6 倍，W e s t e r nb l o t 結(jié)果顯示R a f t 在H e p G 2 ．2 ．1 5 細(xì)胞中的表達(dá)量比其在H e p G 2 細(xì)胞中表達(dá)量明顯增加。2 ．成功構(gòu)建了R a i l 啟動(dòng)子的蟲熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，證明了該啟動(dòng)子有明顯活性。將R a f t 啟動(dòng)子的蟲熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與H

3、 B V 表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)H e p G 2 細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)H B V 能提高熒光素酶活性4 ．6 5 倍( 與對(duì)照相比) 。3 ．用H B V 四種表達(dá)蛋白與尺卵轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)H e p G 2 細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)H B s和H B x 對(duì)月卅啟動(dòng)子活性影響最為明顯，相對(duì)熒光素酶活性分別是對(duì)照組的3 ．6 2 倍和2 ．9 2 倍，而H B c 、H B p 對(duì)啟動(dòng)子活性沒有影響。與此同時(shí)，W e s t e r nb l o t 檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了H B

4、 s 和H B x 表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)H e p G 2細(xì)胞時(shí)中，R a f t 的蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比明顯增加。4 ．轉(zhuǎn)染了H B s 和H B x 干擾質(zhì)粒的H e p G 2 ．2 ．1 5 細(xì)胞中H B s 和H B x的表達(dá)量明顯下降，且此兩種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染時(shí)，對(duì)其余三種蛋白的表達(dá)沒有影響。W e s t e mb l o t 檢測(cè)證明轉(zhuǎn)染了H B s 和H B x 干擾質(zhì)粒后，R a f t 的蛋白表達(dá)水平明顯與對(duì)照組相比明顯降低