人SATB1基因啟動(dòng)子的克隆及其在髓系細(xì)胞分化過程中的活性.pdf

1、該文主要是通過構(gòu)建報(bào)告載體初步確定了SATB1的啟動(dòng)子序列,并通過報(bào)告載體觀察ATRA及氯化鈷(cobalt chloride,CoCl<,2>)模擬的缺氧環(huán)境誘導(dǎo)髓系細(xì)胞分化的過程中是否通過其啟動(dòng)子下調(diào)SATB1的表達(dá).該研究的第一部分,首先克隆了2946bp長(zhǎng)度的SATB1基因5'非編碼區(qū)片段,在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了三個(gè)含不同長(zhǎng)度SATB1啟動(dòng)子的螢光素酶報(bào)告載體pGL3-SP2946-luc,pGL3-SP1718-luc和pGL3-S

2、P751-luc,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Jurkat T,K562,U937和Hela細(xì)胞,通過測(cè)定螢光素酶的表達(dá)活性,觀察到SATB1啟動(dòng)子在不同細(xì)胞內(nèi)活性的差異,以pGL3-SP751-luc的啟動(dòng)子活性(48hr)為例,在Jurkat T和U-937細(xì)胞內(nèi)的活性水平相對(duì)較高,在K-562細(xì)胞內(nèi)的活性水平相對(duì)較低,而在Hela細(xì)胞中基本沒有表達(dá),pGL3-SP2946-luc和pGL3-SP1718-luc在四種細(xì)胞中的啟動(dòng)子活性同樣存在差異.不

3、同長(zhǎng)度的SATB1啟動(dòng)子活性也存在差異,pGL3-SP751-luc在U937,Jurkat T和K562細(xì)胞中的活性均高于pGL3-SP2946-luc和pGL3-SP1718-luc,且與后兩者在三種細(xì)胞中活性較低的情況不同,一直保持著比較高的活性水平,而三者在Hela細(xì)胞中都基本上沒有表達(dá),提示SATB1的核心啟動(dòng)子可能存在于-751至-9bp區(qū)域中.根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,在白血病的誘導(dǎo)分化治療中,ATRA和CoCl<,2>可以誘導(dǎo)髓系細(xì)

4、胞U937分化<'[19-20]>,我們以前的研究結(jié)果顯示,ATRA可以下調(diào)U937中SATB1的表達(dá)<'[18]>.該研究的第二部分,首先利用半定量RT-PCR初步觀察到CoCl<,2>可以在mRNA水平降低U-937細(xì)胞內(nèi)SATB1的表達(dá),在此基礎(chǔ)上分別觀察了ATRA和CoCl<,2>誘導(dǎo)的髓系細(xì)胞U-937分化對(duì)SATB1基因啟動(dòng)子螢光素酶報(bào)告載體pGL3-SP751-luc活性的影響,結(jié)果顯示pGL3-SP751-luc的活性均

5、出現(xiàn)下調(diào),并呈現(xiàn)一定的劑量和時(shí)間依賴效應(yīng),提示ATRA和CoCl<,2>在誘導(dǎo)髓系細(xì)胞U937的分化中下調(diào)SATB1的表達(dá),可能是通過其啟動(dòng)子產(chǎn)生下調(diào)效應(yīng).該研究初步探索了SATB1基因的啟動(dòng)子序列,SATB1啟動(dòng)子在不同細(xì)胞中活性的差異和髓系細(xì)胞分化對(duì)SATB1啟動(dòng)子活性的影響,為進(jìn)一步詳細(xì)研究SATB1的核心啟動(dòng)子,調(diào)控區(qū)中的順式作用元件和與之發(fā)生相互作用的反式作用因子,及最終闡明SATB1基因的表達(dá)調(diào)控和其參與髓系細(xì)胞分化的具體機(jī)