dna鑒定

1、實(shí)驗(yàn)九 DNA的粗提取與鑒定,復(fù)習(xí)目標(biāo)1．了解與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的三個(gè)實(shí)驗(yàn)原理．2．會(huì)對(duì) ．3．掌握 ．本實(shí)驗(yàn)考查,實(shí)驗(yàn)材料選取和處理,實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)健步驟,對(duì)實(shí)驗(yàn)原理的正確理解和運(yùn)用；關(guān)健的實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)注意的問(wèn)題；對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(成功成失敗)作出分析和判斷的能力．,1．實(shí)驗(yàn)原理 利用DNA在

2、 ，中溶解度最低，而 的特點(diǎn)，可以 ，形成沉淀析出，通過(guò)過(guò)濾，得到 ．再利用 利用

3、 的特性，可以鑒定提取的DNA． 2．實(shí)驗(yàn)?zāi)康?(1)了解生物組織中 ． (2)初步掌握 的方法． (3)觀察 物質(zhì)．,物質(zhì)的量濃度為0.1

4、4mol／L的氧化鈉溶液,蛋白質(zhì)此時(shí)的溶解度高,使DNA與蛋白質(zhì)分離,初提取的濾出物DNA,DNA不溶于酒精，但細(xì) 胞中的某些物質(zhì)可溶于酒精的特點(diǎn)，進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA．,DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成藍(lán)色,DNA的存在部位和形式,DNA的粗提取和鑒定,濾取出來(lái)的DNA,3．實(shí)驗(yàn)方法與步驟 (1)提取細(xì)胞核物質(zhì)： (2)溶解核內(nèi)的DNA． (3)析出DNA黏稠物： (4)濾取

5、DNA黏稠物： 。,取5～10mL雞血細(xì)胞懸液加入燒杯中．加蒸餾水20mL。同時(shí)，用玻璃棒沿一個(gè)方向快速充分?jǐn)嚢?min，使血細(xì)胞過(guò)度吸水破裂，細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)，然后用紗布過(guò)濾取其濾液．,在濾液中加入物質(zhì)的量濃度為2mol／L的NaCl 40mL，并用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌lmin，核中DNA游離

6、并充分溶解，染色質(zhì)中的DNA和蛋白質(zhì)分離。,沿?zé)瓋?nèi)壁慢慢加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向不停地輕輕攪拌．由于熔液濃度的下降，使得DNA溶解度下降，蛋白質(zhì)溶解度上升．DNA析出成白色絲狀黏稠物．當(dāng)黏稠物不再增加時(shí)，停止加入蒸餾水．,用多層紗布過(guò)濾，取紗布上DNA的黏稠物,(5)DNA黏稠物再溶解，取含DNA的黏稠物故于燒杯內(nèi)，加入物質(zhì)的量濃度為2mol／L的NaC[溶液20mL，用玻璃棒向一個(gè)方向不停攪拌3min，使黏稠物盡可能

7、多地溶解。 (6)過(guò)濾含DNA的氧化鈉溶液：用兩層紗布過(guò)濾DNA的氯化鈉溶液，取其濾液． (7)提取含雜質(zhì)較少的DNA：在濾液中加入冷卻的無(wú)水乙醇，并用玻璃棒沿一個(gè)方向輕輕攪拌．由于DNA不溶于酒精，會(huì)出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲狀物卷起，井用濾紙吸去表面的水分． (8)DNA的鑒定：兩支試管中各加入物質(zhì)的量濃度為0.015mol／L的氧化鈉溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，攪拌使其充分熔解后．向兩支試管

8、中分別加入4mL二苯胺試劑，混勻后置于沸水浴中加熱5min．待試管冷卻后，比較兩試管的顏色變化，將發(fā)現(xiàn)加入DNA的試管中溶液呈藍(lán)色，從而鑒定DNA的存在．,4．注意事項(xiàng) (1)制備雞血細(xì)胞液時(shí)．要在取新鮮雞血的同時(shí) 。 (2)獲取較多DNA的關(guān)鍵是

9、 ，以便使細(xì)胞膜和核膜破裂，核內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)。 (3)實(shí)驗(yàn)中共3次過(guò)濾。過(guò)濾時(shí)使用的紗布層數(shù)與取其濾液或粘稠物有關(guān)． (4)實(shí)驗(yàn)中有6次攪拌，,加入抗凝劑．使血液分層，取下層血細(xì)胞沉淀,向雞血細(xì)胞液加入足量的蒸餾水,第l、2次要用其濾液，使用的紗布為1--2層，第3次是要用其濾出的黏稠物，使用的紗布為多層,除最后一次攪拌外，前5次攪拌均要朝向一個(gè)方向

10、，并且在析出DNA，DNA再溶解和提取中．各步攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，防止DNA分子斷裂。,(5)實(shí)驗(yàn)中有兩次使用蒸餾水．一次在第一步．加水是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破裂，加水后必須充分?jǐn)嚢瑁粦?yīng)少于5min，使血細(xì)胞充分破裂，第二次加蒸餾水是在第三步，加水是為了稀釋氯化鈉溶液。,(6)實(shí)驗(yàn)中有三次加氯化鈉溶液．在第二步中，當(dāng)加入氯化鈉后．必須充分晃動(dòng)燒杯，使二者混合均勻，加速染色質(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)分離．使DNA充分游離并

11、溶解在氯化鈉溶液中．在第五步中，加氯化鈉溶液也是為了DNA的再溶解。不過(guò)這時(shí)溶液中蛋白質(zhì)含量已很少．在第八步中．加的氯化鈉溶液的濃度比前2次低的多，但還是為溶解DNA。,(7)在第七步中，必須使用冷酒精(至少在50C以下存放24h)，并且將1份含DNA的氯化鈉溶液加入到2份的冷酒精中．如果懸浮在溶液中的DNA絲狀物較少，可將混合液放入冰箱中再冷凍幾分鐘。,(8)本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵 (9) 5. 實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象

12、與討論 最后一次攪拌時(shí)． 出現(xiàn)，這就是DNA．用 。,是保證提取到足量且較純凈的DNA．因?yàn)镈NA在細(xì)胞中含量少，所以在下列步驟中應(yīng)特別注意，在第一步中使用的雞血的量要在180mL左右．提取細(xì)胞核物質(zhì)時(shí)

13、要充分?jǐn)嚢?min以上．在第二步中要充分晃動(dòng)燒杯，在第三步中加蒸餾水要控制好用量，同時(shí)應(yīng)用玻璃棒緩緩攪拌使DNA聚集在玻璃棒上．在第四步中要使用多層紗布過(guò)濾，在第五步中要充分?jǐn)嚢瑁诘谄卟街惺褂美渚凭驗(yàn)镈NA易吸附在玻璃容器上，所以實(shí)驗(yàn)中最好使用塑料燒杯和試管，以減少DNA的損失。,盛放雞血細(xì)胞液的容器和實(shí)驗(yàn)中的燒杯和試管最好也是塑料制的，因?yàn)椴Ａе破繁砻鎺щ姾?，DNA中的磷酸基帶相反的電荷，會(huì)被吸附于玻璃表面，減少DiNA含量

14、。,玻璃棒上會(huì)有乳白色絲狀物,二苯胺試劑鑒定時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)試管中溶液呈藍(lán)色,典例分析 例 在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，先后兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是 ( ) (A)稀釋血液．沖洗樣品 (B)使血細(xì)胞破裂、降低NaCI濃度使DNA析出 (C)使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 (D)使血細(xì)跑破裂，提取含雜質(zhì)較少的DNA 解析；第一次加入蒸餾水的作用是使血細(xì)胞過(guò)度洗水而破裂，以便核

15、內(nèi)物質(zhì)釋放．第二次如入適量蒸餾水，是為了降低 NaCl溶液濃度，使DNA因溶解度達(dá)到最小而析出．,B,挑戰(zhàn)誤區(qū) 例，下列操作中．對(duì)DNA的提取量影響較小的是 ( ) (A)使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放出DNA等核物質(zhì) (D)攪拌時(shí)，要用玻璃棒沿一個(gè)方向輕緩攪動(dòng) (C)在析出DNA黏稠物時(shí)，要緩緩加蒸餾水．直至溶液中黏稠物不再增多 (D)在用酒精沉淀DNA時(shí)，要使用冷酒精，甚至再將混

16、合液旗入冰箱中冷卻 解析：在B向所述操作中，可以保怔DNA分子的完整性．但不影響提取量。除了A，C中的 、D三項(xiàng)影響DNA的提取量外．使用塑料器皿也可以減少DNA在操作中的損失。易錯(cuò)分析：不注意掌握關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)步驟，實(shí)驗(yàn)容易失?。绢}易錯(cuò)選其他項(xiàng)。,B,能力訓(xùn)練 一、選擇題 1．對(duì)三次過(guò)濾的敘述中．不正確的是 ( ) (A)第一次過(guò)濾后，核物質(zhì)存在于濾出的固體物中 (B)第二次過(guò)濾后．

17、使用多層紗布，DNA存在于紗布上的黏稠物中 (C)第三次過(guò)濾后，DNA存在于濾液中．可進(jìn)一步除去非DNA物質(zhì) (D)上述B、C兩項(xiàng)均正確 2．在研究DNA的基因樣本前，采集來(lái)的血樣需用蛋白水解酶處理，然后用有機(jī)溶劑除去蛋白質(zhì)．請(qǐng)問(wèn)，用蛋白水解酶處理血樣的目的是 ( ) (A)除去血漿中的蛋白質(zhì) (B)除去染色體上的蛋白質(zhì) (C)除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì) (D)除去血細(xì)胞中

18、的所有蛋白質(zhì)，使DNA釋放，便于進(jìn)一步提純,A,D,3．在實(shí)驗(yàn)中，有兩次DNA的沉淀析出．其依據(jù)的原理是 ( ) ①DNA在氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L時(shí)熔解度最低 ②DNA在冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95H的酒精中能沉淀析出 (A)兩次都是① (B)兩次都是② (C)第一次是①，第二次是② (D)第一次是②，第二次是①

19、 4．一位同學(xué)受老師委托去采集雞血，雞群中有雌雞也有雄雞，他想應(yīng)該取含紅細(xì)胞最多的個(gè)體的血．結(jié)果他選了下列一只雞 ( ) (A)健壯的雄雞 (B)健壯的雌雞 (C)小母雞 (D)小公雞 5．DNA在下列哪種濃度的NaCl溶液中溶解度最低 ( ) (A)2mol／L (B)0.14mol／L (C)0.015mol／L

20、 (D)0.1mol／L,C,A,B,6．從雞血細(xì)胞中提取DNA所用的提取液是 ( ) (A)NaCI溶液 (B)酒精 (C)二苯胺 (D)檸檬酸鈉 7．蛋白酶能使蛋白質(zhì)水解而使染色質(zhì)中的DNA分離出來(lái)，下列藥品可達(dá)到上述同一目的的是 ( ) (A)蒸餾水 (B)NaCI溶液 (C)NaOH溶液 (D)鹽酸,A,B,二、非選擇題 8

21、 . DNA在氧化鈉溶液中的溶解度有二重性，隨著NaCI溶液濃度的變化而變化． (1)請(qǐng)?jiān)谙铝袧舛鹊穆然c熔液中，選出能使DNA析出最徹底的一種( )和溶解度最高的一種( ) (A)0.14mol／L (B)2mol／L (C)0.015mol／L (D)0.3mol／L (2)欲使溶有DNA的物質(zhì)的量的濃度為2mol／L的氧化鈉溶液中的DNA析出，需降低氯化鈉溶液的濃度．最有

22、效的方法是( ) （A)加蒸餾水 （B)加礦泉水 (C)加清水 (D)加生理鹽水 (3)DNA不溶于酒精溶液．但細(xì)胞中的某些物質(zhì)卻可以溶于酒精溶液，利用這一原理可以 ．可以推測(cè)溶于酒精的物質(zhì)中可能有 。 (4)

23、利用DNA遇 呈藍(lán)色的特性．將該物質(zhì)作為鑒定 的試劑．其實(shí)驗(yàn)過(guò)程要點(diǎn)是向放有 的試管中加入4mL的 ．觀察試管中溶液顏色的變化．這個(gè)實(shí)驗(yàn)也說(shuō)明DNA耐 溫，加熱有利于 ．冷卻則有利于DNA ．,A,B,A,除去雜質(zhì),某些鹽類、蛋白質(zhì)、糖類或其他大分子物質(zhì)

24、,二苯胺,DNA,DNA,二苯胺試劑,高,加快染色的反應(yīng)速度,析出,9. 在DNA的粗提取過(guò)程中．有五次用玻璃棒攪拌．第一次攪拌加蒸餾水的雞血細(xì)胞懸浮液是為了 ，第二次攪拌加物質(zhì)的量濃度為2mol／L的氯化鈉溶液的濾液是為了使其與DNA ，第三次攪拌加蒸餾水至物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L氯化鈉溶液是為了

25、 ，第四次攪拌放入物質(zhì)的量濃度為2mol／L氧化鈉溶液中的紗布上有黏稠物是為了 ：第五次攪拌體積分?jǐn)?shù)為95％的酒精是為了 。10．關(guān)于DNA粗提取的實(shí)驗(yàn)材料的選擇，也經(jīng)過(guò)了多次實(shí)驗(yàn)效果的比較，最終選擇雞血做實(shí)驗(yàn)材料

26、．請(qǐng)根據(jù)圖回答下列問(wèn)題：,加速細(xì)胞破裂,混合均勻,稀釋NaCl溶液析出含DNA的黏稠物,使黏稠物層盡可能多地溶于溶液中,提取含雜質(zhì)較少的DNA,(1)雞血細(xì)胞中紅細(xì)胞 ，家雞屬于鳥(niǎo)類，新陳代謝旺盛，因而血液中 細(xì)胞數(shù)目較多，可以提供豐富的 。 (2)實(shí)驗(yàn)前由老師用血細(xì)胞液供同學(xué)們做實(shí)驗(yàn)材料．而不用雞全血，主要原因是

27、 。 (3)在牧區(qū)采集牛、羊和馬血比較方便．若用該材料按實(shí)驗(yàn)要求完成實(shí)驗(yàn)步驟后，結(jié)果是 ．這是因?yàn)檫@些動(dòng)物和人類一樣 ，但若改用動(dòng)物肝臟傲實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)?zāi)茼樌M(jìn)行．這是因?yàn)?。 (4)若選用動(dòng)物肝