dna的粗提取與鑒定

1、DNA的粗提取與鑒定【課前復(fù)習(xí)】在實(shí)驗(yàn)前如果先來(lái)回顧細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、DNA存在的部位、染色質(zhì)的主要成分、滲透作用的原理、生物組織中有機(jī)化合物鑒定的方法等知識(shí)，既有利于掌握新知識(shí)，又便于將新知識(shí)納入知識(shí)網(wǎng)絡(luò)中。溫故——會(huì)做了，學(xué)習(xí)新課才能有保障1用蛋白酶對(duì)細(xì)胞核中能被堿性染料染色的物質(zhì)進(jìn)行處理，得到了一些細(xì)絲，這些絲狀物可能是A蛋白質(zhì)BDNACRNAD脫氧核苷酸解析：細(xì)胞核中被堿性染料染色的物質(zhì)應(yīng)是染色質(zhì)或染色體，染色質(zhì)的化學(xué)成分為蛋白質(zhì)和D

2、NA，用蛋白酶處理，因?yàn)槊傅膶Ｒ恍?，只?huì)分解蛋白質(zhì)而不會(huì)對(duì)DNA有分解作用，所以保留下來(lái)的應(yīng)該是DNA絲。答案：B2人的紅細(xì)胞的壽命較短，這一事實(shí)體現(xiàn)了A環(huán)境因素的影響B(tài)功能對(duì)壽命的決定C核質(zhì)相互依存的關(guān)系D遺傳因素的作用解析：因?yàn)槿撕筒溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒(méi)有核，所以壽命較短，反映了核質(zhì)之間的相互依存的關(guān)系。答案：C3真核細(xì)胞是由_____________、_____________、_____________構(gòu)成，細(xì)胞核又包括____

3、_________、_____________、_____________、_____________（染色體），染色質(zhì)主要由____________組成。答案：細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核核膜核液核仁染色質(zhì)DNA和蛋白質(zhì)4做“生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)”時(shí)，要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的實(shí)驗(yàn)材料。請(qǐng)根據(jù)下表所列各種材料回答問(wèn)題：各種可供實(shí)驗(yàn)的材料梨黃桃胡蘿卜黃豆花生種子小麥種子①其中適合于鑒定糖的是_____________，理由

4、是_________________________，鑒定試劑用____________。②小麥種子不如花生種子更適合用來(lái)鑒定脂肪，這是因?yàn)開(kāi)____________________，你怎樣進(jìn)行鑒定？_____________________。③適合于鑒定蛋白質(zhì)的是____________，理由是_____________，鑒定所用的試劑是____________。解析：用特定的顏色反應(yīng)來(lái)鑒定生物組織中的各成分首先要考慮到取材，選取的材

5、料應(yīng)是該成分含量相對(duì)較多，并且顏色盡量淺淡或無(wú)色，以減少對(duì)實(shí)驗(yàn)效果的影響；其次要考慮提取的方法；第三要知道鑒定的方法。答案：①梨梨的組織細(xì)胞顏色為白色，并且糖含量較高斐林試劑②小麥種子的脂肪含量不如花生種子高，也不容易做切片用蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ試劑鑒定③黃豆和花生蛋白質(zhì)含量高雙縮脲試劑知新——先看書，再來(lái)做一做填充題：1使溶解在NaCl溶液中的DNA析出的原理是_________________________。2實(shí)驗(yàn)中提取含雜質(zhì)較少的DN

6、A的原理是__________________________。3實(shí)驗(yàn)中用作鑒定DNA的試劑是____________；原理是__________________________。4實(shí)驗(yàn)的方法步驟是：制備雞血細(xì)胞液→提取____________→溶解____________→析出_____________→溶解_____________→析出2實(shí)驗(yàn)材料雞血細(xì)胞液：先配備10%的檸檬酸鈉溶液，按180mL新鮮雞血混合100mL10%檸檬酸

7、鈉溶液的比例，立即將血液與檸檬酸鈉充分混合，同時(shí)用玻璃棒攪拌以免凝血。然后，用離心機(jī)以1000轉(zhuǎn)／min的速度離心2min后，用吸管除去離心管上清液，就可獲得所需的雞血細(xì)胞懸液。每組大約需要5～10mL雞血細(xì)胞懸液。如果無(wú)離心機(jī)，可將與檸檬酸鈉充分混合的血液置于冰箱內(nèi)，靜置一天，使血細(xì)胞自行沉淀后，也可獲得所需的雞血細(xì)胞懸液。但使用離心機(jī)效果更好。3試劑與儀器(1)2molL的NaCl溶液：稱取117g的NaCl，加蒸餾水至1000mL

8、，使之完全溶解，即可獲得2molL的NaCl，須按此配方配備大量的2molL的NaCl。(2)二苯胺試劑：A液—1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL濃硫酸，用棕色瓶保存。B液—體積分?jǐn)?shù)為0.2%的乙醛溶液。實(shí)驗(yàn)前，將0.1mL的B液加入到10mL的A液中，現(xiàn)用現(xiàn)配。(3)0.015molL的NaCl溶液：稱取0.88gNaCl加蒸餾水至1000mL，使之完全溶解。(4)塑料杯和試管：DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和試

9、管可減少提取過(guò)程中DNA的損失。4實(shí)驗(yàn)方法與步驟為方便理解和記憶，將方法步驟歸納如下表。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容方法步驟原理(1)提取細(xì)胞核物質(zhì)：取5～10mL雞血細(xì)胞懸液注入50mL燒杯中，加蒸餾水20mL，同時(shí)，用玻璃棒沿一個(gè)方向快速充分?jǐn)嚢?，使血?xì)胞過(guò)度吸水破裂，細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)，然后用紗布過(guò)濾取其濾液于500mL燒杯中(2)溶解核內(nèi)的DNA：在濾液中加入2mol／L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌1min，核中DNA游離并充分溶

10、解，染色質(zhì)中的DNA和蛋白質(zhì)分離(3)析出含DNA黏稠物：沿?zé)瓋?nèi)壁緩慢加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向不停地輕輕攪拌。由于溶液濃度的下降，使得DNA溶解度下降，蛋白質(zhì)溶解度上升，DNA析出成白色絲狀黏稠物，當(dāng)黏稠物不再增加時(shí)，停止加入蒸餾水。（這時(shí)溶液中NaCl的物質(zhì)的量濃度相當(dāng)于0.14mol／L）一、提取DNA(4)濾取含DNA黏稠物：用多層紗布過(guò)濾，取紗布上DNA的黏稠物(5)DNA黏稠物再溶解：取含DNA黏稠物于50mL燒杯