花椒DNA提取方法及條形碼鑒定研究.pdf

1、ClassNumber：$5659StudentNumber：S20124105SichuanAgriculturalUniversitySubmittedinpartialFulfillmentoftheRequirementforⅣ【ASTeRDEGREEDNAextractionandidentificationofZanthoxylumusingDNAbarcodingByYuYadongDirectedbyProfYeMeng

2、May2015摘要蕓香科(Rutaceae)花椒屬(Zanthoxylum)植物在我國有39種，目前對(duì)其區(qū)分主要以形態(tài)鑒定為主。DNA條形碼鑒定是一種新型的物種鑒定方法，是利用基因組中一段相對(duì)較短的片段對(duì)物種進(jìn)行鑒定的分子技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)探究對(duì)花椒屬植物不同材料樣本DNA提取方法的優(yōu)化，使用DNA條形碼鑒定方法對(duì)花椒屬9種植物共121份樣本使用ITS2序列進(jìn)行鑒定研究，旨在使用分子鑒定的手段準(zhǔn)確地對(duì)花椒屬植物進(jìn)行鑒定，并嘗試使用ITS2序列

3、對(duì)花椒(ZBungeanum)及竹葉花椒(Zarmatum)種內(nèi)的不同品種進(jìn)行鑒定。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：(1)使用在DNA提取中較為常見的兩種方法CTAB法及試劑盒法，對(duì)本次實(shí)驗(yàn)采集的花椒屬121份樣本進(jìn)行提取與改良，結(jié)果表明，兩種方法對(duì)新鮮葉片及經(jīng)過硅膠干燥葉片材料的DNA提取均能獲得成功，果皮類材料經(jīng)過改良提取方法：在加入DNA提取液之前，使用核分離液洗滌3次，水浴時(shí)間lh，也能成功提取DNA。兩種方法均能獲得符合PCR要求的總

4、DNA。PCR后電泳檢測條帶明亮、單一，其樣本經(jīng)測序、序列拼接及注釋剪切后共獲得121條ITS2序列。(2)使用ITS2片段對(duì)花椒屬植物進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明ITS2序列能夠有效鑒定本次實(shí)驗(yàn)收集的花椒屬9種植物，除花椒ZBungeanum以夕b，8種植物的種內(nèi)最大K2P距離均小于與其余物種問的種問最小K2P距離，可以明顯與其余物種進(jìn)行區(qū)分。各物種在ITS2序列中有穩(wěn)定區(qū)別于其他8個(gè)物種的位點(diǎn)，可作為鑒別花椒屬9種植物的輔助手段，能將花椒屬9

5、種植物進(jìn)行良好地區(qū)分。鄰接(NJ)法構(gòu)建的系統(tǒng)聚類樹，各物種均能各自聚為一支，能較好地與其他物種較好地區(qū)分開。(3)在使用ITS2序列對(duì)花椒及竹葉花椒的品種進(jìn)行鑒定時(shí)，花椒種內(nèi)4個(gè)品種中，漢源花椒、越西貢椒及靈山正路椒ITS2序列一致，無法使用ITS2序列進(jìn)行鑒定區(qū)分，但來自四川松潘、茂縣、汶川的花椒樣本與甘肅禮縣、臨夏、天水的花椒樣本在3個(gè)位點(diǎn)上一致表現(xiàn)出與其余產(chǎn)地花椒樣本的差異。竹葉花椒種內(nèi)3個(gè)品種在ITS2序列上并無穩(wěn)定、明顯差異