重樓近緣種及商品藥材的DNA條形碼鑒定研究.pdf

1、 目的：對4條不同的DNA條形碼(matK、trnL-trnF、rpoC1、IT S)和組合進行篩選,尋找能夠快速、有效、可靠地鑒別重樓與其常見近緣種及市售商品重樓的DNA條形碼或組合。力圖發(fā)現重樓這一珍稀藥用植物的替代資源,為補充和完善重樓屬DNA條形碼方面的研究提供方法的參考。
方法：使用matK、trnL-trnF、rpoC1和核ITS的通用引物對采集的32個樣品材料進行PCR擴增和測序,比較各序列擴增和測序效率、種

2、內和種間變異,進行 barcoding gap 分析,以此評價各序列對采自云南、四川的重樓藥材和購自市場的商品重樓的鑒別能力。
結果：
1.ITS、matK、rpoC1、trnL-trnF序列作為鑒定重樓與常見混偽品及其商品藥材的DNA條形碼候選序列,其擴增效率都能達到100%,ITS測序成功率達到了100%,trnL-trnF、matK序列的測序成功率分別為9 6%、82%,rpoC1序列的測序成功率能達到70

3、%。
2.ITS序列提供了最大種間變異且Wilcoxon檢驗表明其種間最小變異明顯大于其種內最大變異,較有利于物種的鑒別；barcoding gap與其他DNA條形碼候選序列相比具有明顯的優(yōu)勢。
3.在鑒定效率方面,ITS序列對重樓與其商品藥材的鑒別效率最高,為96.2%。ITS+trnL-trnF組合序列在對親緣關系很近的易混品材料的鑒別效率能達到100%。
4.基于ITS、ITS+trnL-trn

4、F構建的樹中,親緣關系近的都各聚一支,且市購的10個商品重樓樣本中,商品藥材3與華重樓首先聚在一起,提示其與華重樓有較近的親緣關系,而商品藥材4與云南重樓親緣關系較近,商品藥材1與花葉重樓的親緣關系較近,商品藥材2與拳參一起聚在重樓屬物種的外圍,據此可鑒別商品藥材2是偽品。
結論：ITS 序列可以作為鑒定重樓與其常見近緣種及市售商品藥材的 DNA 條形碼候選序列,同時我們推薦 ITS+trnL-trnF 組合序列作為其補充序