異種脫細胞結(jié)膜基質(zhì)移植修復(fù)兔結(jié)膜缺損的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討脫細胞結(jié)膜的制備方法，并觀察其移植修復(fù)兔結(jié)膜缺損的可行性。
　　方法：
　　1.脫細胞結(jié)膜基質(zhì)的制備
　　取新鮮豬球結(jié)膜（宰后3小時，其僅含少許結(jié)膜下組織）先用0.2％戊二醛處理5min，再用0.25%胰酶/0.02%EDTA、1%TritonX-100、或兩者聯(lián)合進行脫細胞處理，根據(jù)DAPI染色結(jié)果篩選出合適的結(jié)膜脫細胞方法，脫細胞處理后，將結(jié)膜置于超凈臺內(nèi)通風(fēng)干燥、紫外消毒8h備用。
　

2、　2.脫細胞結(jié)膜基質(zhì)的相關(guān)檢測
　　使用可見分光光度計檢測檢測脫細胞結(jié)膜基質(zhì)的透光性，細菌、真菌培養(yǎng)行微生物檢測，免疫組織化學(xué)法檢測其抗原性，MTT法檢測細胞毒性。
　　3.異種脫細胞結(jié)膜作為移植材料，修復(fù)兔結(jié)膜缺損的應(yīng)用
　?。?）兔結(jié)膜缺損動物模型的建立
　　游離去除實驗兔鼻上方約20mm×8mm球結(jié)膜、筋膜，并剪除對應(yīng)部分瞼結(jié)膜。
　?。?）移植材料的動物模型
　　隨機將20只新西蘭大白兔分成4

3、組，每組5只。A組移植制備的脫細胞結(jié)膜基質(zhì)；B組移植羊膜；C組移植未脫細胞異種結(jié)膜；D組不給予治療。術(shù)后3天，1周，2周，行結(jié)膜熒光素鈉染色大體觀察對照組及實驗組結(jié)膜愈合、結(jié)膜囊狹窄、結(jié)膜粘連和血管化情況；術(shù)后1周，2周，6周取材處死實驗組兔分別行HE染色，6周后取材行免疫熒光染色，有無結(jié)膜上皮細胞蛋白的表達，活體印記細胞學(xué)檢查，觀察異種脫細胞結(jié)膜移植治療結(jié)膜缺損的效果。
　　結(jié)果：
　　1.與TritonX-100和胰酶/

4、EDTA單獨處理相比，先用1%TritonX-100作用24h，再用0.25%胰酶/0.02%EDTA作用2h，可將豬結(jié)膜中的細胞脫除干凈。
　　2.脫細胞結(jié)膜基質(zhì)的透明度好，無抗原性，無細胞毒性，其膠原纖維排列整齊、結(jié)構(gòu)良好、無細胞成分。
　　3.脫細胞豬結(jié)膜移植組（A組）植片存活良好，1周時瞼結(jié)膜缺損處可見熒光素鈉染色，移植物覆蓋處光滑不著色，角膜緣處新生血管長入，HE染色可見單層結(jié)膜上皮細胞覆蓋；2周后未見熒光素鈉染色

5、著色，移植物大量血管長入，呈粉紅色外觀， HE染色可見結(jié)膜上皮覆蓋多層細胞，結(jié)膜印跡細胞染色發(fā)現(xiàn)有杯狀細胞和上皮細胞；移植后6周行免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)結(jié)膜上皮細胞角蛋白（PCK）表達陽性，說明脫細胞結(jié)膜基質(zhì)上皮完整。羊膜移植組（B組）1周后羊膜出現(xiàn)溶解吸收，2周后結(jié)膜瘢痕形成。未脫細胞結(jié)膜移植組（C組）1周后移植的異體結(jié)膜已溶解脫落，2周后結(jié)膜瘢痕形成，未給予治療的結(jié)膜缺損組（D組）2周后均形成結(jié)膜瘢痕。
　　結(jié)論：
　　1.