可注射脫鈣骨基質(DBM)修復兔橈骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：研究脫鈣骨基質(demiileralized bone matrix,DBM)混合醫(yī)用幾丁糖(medical chitogan)制備成可注射骨修復材料(injectable boneregeneration composite,IBRC)修復骨缺損的效果,并與凍干骨修復效果比較,為同種異體骨材料新劑型的研究和臨床應用提供理論基礎和實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴可注射脫鈣骨基質(DBM)及凍干骨的制備:選用14只新西蘭大白兔處死

2、后,取雙側尺橈骨干皮質骨塊制備DBM,取雙側股骨髁部松質骨決制備凍干骨?？勺⑸涿撯}骨基質制備:尺橈骨皮質骨塊依次經(jīng)深低溫冷凍(-80℃),切割粉碎成顆粒狀,乙醚脫脂,鹽酸脫鈣24h,冷凍干燥,輻照滅菌制備成脫鈣骨基質顆粒。脫鈣骨基質與濃度20mg/ml醫(yī)用幾丁糖凝膠依據(jù)體積比5:2充分混合后,分裝成0.7ml可注射脫鈣骨基質(即舍0.5ml脫鈣骨基質和0.2ml的醫(yī)用幾丁糖凝膠),4℃冰箱存放,備用。凍干骨制備:股骨髁部松質骨依次經(jīng)深低

3、溫冷凍(-80℃),切割粉碎成顆粒狀,乙醚脫脂,冷凍干燥,輻照滅菌,4℃冰箱存放,備用。⑵可注射脫鈣骨基質(DBM)修復骨缺損的效果研究:將60只新西蘭大白兔,隨機抽取54只分別編入A組(DBM組),B組(可注射DBM組)、C組(凍干骨組),各18只；余下6只為D組(空白對照組)。將新西蘭大白兔的左側橈骨中1/3連同骨膜切除1.5cm長的骨塊,做成標準骨缺損模型,A組植入DBM顆粒(0.5ml),B組植入可注射DBM(0.5mlDBM+

4、0.2ml醫(yī)用幾丁糖),C組植入凍干骨顆粒(0.5ml),D組不植入任何骨材料。在術后2周、4周、8周、12周,各組均行X線攝片；術后4周、8周、12周,A、B、C每組各時間點取6只兔子通過大體觀察、HE染色及改良麗春紅三色染色病理組織學檢查、熒光雙標測量,以及Micro-CT測量來觀察、評價骨愈合的程度,分析各組之間骨愈合有無差異。
　　 結果：①肉眼觀察Hiteheock粘連程度分級:術后各組在相同時間點的差異無統(tǒng)計學意義(

5、P>0.05),但各組在不同時間點的組內差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。②X線攝片檢查:依據(jù)Lane—Sandhu X線評分標準評價各個時間點骨修復情況。2周時A、B、C組間無顯著差異(P>0.05),但A、B、C組與D組均有顯著差異(P<0.05)；4周、8周、12周時A組與B組無顯著差異(P>0.05),A組與C組、B組與C組和A、B、C組分別與D組比較均有顯著差異(P<0.05)。③組織學觀察：HE染色組織學觀察:觀察骨小梁、纖

6、維結締組織和類骨組織的生成量以及成骨細胞,并用Lane—sandhu法組織學評價。4周時A組優(yōu)于B組和C組,且B組優(yōu)于C組,組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。8周、12周時A組與B組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；A組優(yōu)于C組,B組優(yōu)于C組,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。改良麗春紅三色組織學觀察:4周、8周、12周時,新生骨組織的生長活躍程度均為A組與B組近似,A組和B組優(yōu)于C組。④熒光雙標測量結果:4周、

7、8周、12周時,A組與B組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；A組與C組以及B組與c組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。5、Micro-CT測量結果:定量計算新生骨的體積,4周、8周、12周時,A組與B組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；A組與C組以及B組與c組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：⑴制備的可注射脫鈣骨基質具有良好的修復骨缺損效果,其效果與脫鈣骨基質顆粒修復骨缺損相當。⑵制備的可注射脫鈣骨