龍血竭對大鼠撕脫皮瓣保護作用的研究

1、龍血竭對大鼠撕脫皮瓣保護作用的實驗研究羅志紅1魯開化2★張榮平3王繼華4胡煒彥3康文博2王師平2(1.昆明醫(yī)學院2007級博士研究生，昆明605000；成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院附屬中醫(yī)院，昆明6500322.第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院全軍整形外科研究所，西安710032；3.昆明醫(yī)學院藥學院，昆明605000；4.昆明醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院整形外科昆明650101；）摘要摘要目的：目的：探討龍血竭對大鼠撕脫皮瓣的保護作用及機制。方法：方法：實驗大鼠隨機

2、分為空白對照組、龍血竭灌胃組、龍血竭外用組。在大鼠背部制作一個蒂在尾部的3cm9cm大小的撕脫傷皮瓣，皮瓣碾壓撕脫后原位縫合。分別于術后1h、12h、24h取皮瓣近、中、遠段組織檢測丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及髓過氧化物酶(MPO)活性，術后7天計算皮瓣成活率。結果：結果：龍血竭能降低MDA含量和MPO活性，增加SOD活性。術后7天皮瓣成活率龍血竭組明顯升高。結論：結論：龍血竭可提高撕脫皮瓣組織的抗氧化能力，減輕中性

3、粒細胞在皮瓣中的聚集，從而發(fā)揮對撕脫皮瓣的保護作用。關鍵詞關鍵詞：龍血竭撕脫皮瓣丙二醛超氧化物歧化酶髓過氧化物酶中圖分類號：中圖分類號：文獻標志碼：文獻標志碼：皮膚撕脫傷是臨床常見的創(chuàng)傷之一組織壞死機理復雜，臨床缺乏有效的防治方法。近年來大量研究表明自由基在常規(guī)皮瓣缺血壞死中起著十分重要的作用撕脫皮瓣也存在著與常規(guī)皮瓣壞死類似的因素課題組在前期的實驗研究中也發(fā)現(xiàn)皮膚撕脫傷后組織中脂質(zhì)過氧化反應增強說明自由基在撕脫皮瓣壞死中可能發(fā)揮重要的

4、作用[1]。龍血竭是傳統(tǒng)名貴中藥為龍舌蘭科劍葉龍血樹脂提煉的純天然藥物臨床應用廣泛特別是在創(chuàng)傷修復方面療效顯著?，F(xiàn)代研究證實，血竭具有能改善局部血循環(huán)，抑制血小板聚集，抗血栓形成，清除自由基和抗氧化作用，促進成纖維細胞增殖，促進角質(zhì)形成細胞的游走、增殖，抗細菌、抗真菌及消炎止痛等多種藥理活性[24]。但龍血竭對撕脫皮瓣影響的實驗研究目前尚無文獻報道。本實驗采用大鼠撕脫傷模型檢測龍血竭對大鼠皮瓣撕脫傷后組織中SOD、MDA、MPO的影響探

5、討龍血竭對撕脫皮瓣損傷的保護作用。1材料和方法材料和方法1.11.1龍血竭外用藥的制備：龍血竭外用藥的制備在昆明醫(yī)學院天然藥物藥理實驗室完成，龍血竭粉（昆明醫(yī)學院天然藥物藥理實驗室提供）配制成濃度為10%的外用制劑。1.21.2實驗動物及主要試劑、儀器：SD大鼠75只（雌雄不限），體重220mg250mg，購于第四軍醫(yī)大學動物實驗中心。皮膚撕脫傷模型機（由第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院整形外科研究所研制）；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD

6、)、髓過氧化物酶(MPO)測試盒（南京建成生物工程研究所）。2方法方法2.1大鼠撕脫傷皮瓣模型的制備：1％戊巴比妥納（40mgkg1）ip麻醉，剃毛機剃除背部的毛后用硫化鈉脫毛，皮膚常規(guī)消毒后以背部中線為準，蒂為于尾側，設計3cm9cm大小的長條形任意皮瓣，切開皮膚至肉膜，在肉膜下掀起皮瓣，然后將皮瓣放置于大鼠皮膚撕脫傷模型機固定底板與齒輪之間，調(diào)節(jié)二者合適高度，確保對皮瓣產(chǎn)生基本相同的壓力；使齒輪旋轉并從皮瓣的遠端向蒂部快速滑動，對皮

7、瓣形成撕脫傷。重復碾壓4次。將皮瓣復位后用50絲線原位縫合。2.2實驗分組：將大鼠隨機分為3組：空白對照組(A）、龍血竭灌胃組(B）、龍血竭外用組(C)，每組25只，在撕脫皮瓣形成后原位縫合，術后B、C組分別給予龍血竭灌胃（2gkg1每日2次）、龍血竭外用（16gkg1，每日3次）。連續(xù)給藥7天。[通訊作者]：魯開化第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院全軍整形外科研究所，教授，博士生導師，Tel:13809186698Email:lukaihua@fm

8、mu.12h379.5636.65398.3444.311）2）357.2445.431）2）24h321.4530.36328.4445.451）2）289.4344.311）2）注：與對照組比較，1）P﹤0.05；與灌藥組比較，2）P﹤0.05；表3各組皮瓣組織術后各組皮瓣組織術后1h1h、12h12h、24hMPO24hMPO活性檢測活性檢測（sUg）x組別時間近段中段遠段對照組1h4.920.235.450.237.750.25

9、12h7.170.328.260.2510.510.3324h9.450.2510.840.3614.750.42灌藥組1h4.880.275.280.317.660.2612h6.050.241）6.530.351）8.780.361）24h7.140.211）8.880.431）11.230.321）外用藥組1h4.830.225.370.267.890.4412h4.350.252）3）4.790.322）3）6.020.242）

10、3）24h5.170.352）3）5.970.222）3）8.450.452）3）注：與對照組比較，1）P﹤0.05，2）P﹤0.01；與灌藥組比較，3）P﹤0.05表4大鼠皮瓣術后大鼠皮瓣術后7天成活率天成活率(s%)x組別例數(shù)術后第7天對照組1039.757.45灌藥組1049.586.161）外用藥組1065.456.282）3）注：與對照組比較，1）P﹤0.05，2）P﹤0.01；與灌藥組比較，3）P﹤0.054討論討論皮膚撕脫

11、傷后撕脫皮瓣存在缺血再灌注過程撕脫傷造成組織內(nèi)和撕脫皮瓣下廣泛出血撕脫組織內(nèi)大量炎細胞浸潤血管栓塞和變性壞死這些都為氧自由基的產(chǎn)生創(chuàng)造了條件[5]。自由基具有極為活潑的反應性它可與細胞成分如細胞膜磷脂、蛋白質(zhì)、核酸等發(fā)生反應最終使細胞膜的完整性遭到破壞進一步使細胞的功能代謝也發(fā)生障礙。超氧化物歧化酶(SOD)是體內(nèi)重要的抗氧化酶當體內(nèi)自由基生成增多時它與超氧陰離子反應生成過氧化氫再由過氧化氫酶和谷胱甘肽酶轉變成水從而使自由基清除保護細胞

12、免受損傷。自由基通過脂質(zhì)過氧化反應生成脂質(zhì)過氧化物(LPO)丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化反應的終產(chǎn)物之一，與自由基代謝密切相關測定MDA的含量可代表LPO的含量也能反應自由基產(chǎn)生的多少。本研究發(fā)現(xiàn)與對照組比較，龍血竭灌胃組和外用組均能降低MDA水平，提高SOD水平，其中以外用藥組明顯，說明龍血竭可以減少自由基的產(chǎn)生，保護SOD活力，從而提高組織清除氧自由基的能力。中性粒細胞髓過氧化物酶(MPO)是中性粒細胞的標志酶，直接與中性粒細胞的數(shù)

13、目相關。因此可以通過檢測皮瓣組織中的MPO活性來檢測中性粒細胞在皮瓣組織中的浸潤、聚集情況。大量研究表明中性粒細胞聚集是加重皮瓣缺血損傷的重要因素。本實驗在術后1h、12h、24h檢測皮瓣組織中MPO的活性發(fā)現(xiàn)，MPO活性遠段最高，中段次之，近段最低，這反映出中性粒細胞在皮瓣缺血最重的區(qū)域聚集最多，這種現(xiàn)象與中性粒細胞參與到缺血皮瓣損傷的機理學說相吻合。實驗發(fā)現(xiàn)術后12h、24h，龍血竭灌胃組與外用組皮瓣組織中MPO活性均低于對照組，其